Identifizierung neuer O-mannosylierter Proteine in murinem Hirngewebe

• Applicant: Dr. Isabelle Breloy
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2009 to 2015
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 147522730

In diesem Projekt sollen neue O-mannosylierte Proteine in Säugetieren identifiziert werden um erste Hinweise auf die Funktion dieser bislang wenig charakterisierten Proteinmodifikation zu erhalten. Ausgehend von Strukturparametern einer cis-lokalisierten Erkennungssequenz für die Induktion der O-Mannosylierung im alpha-Dystroglykan, dem bislang einzigen charakterisierten O-mannosylierten Protein, (Breloy et al., 2008, J. Biol. Chem. 283, 18832-18840) konnten wir in silico eine Serie potentiell O-mannosylierter Targetproteine identifizieren. Für eines dieser Proteine, das Neurofascin konnten wir eine O-Mannosylierung bereits bestätigen. Im Rahmen des Projektes sollen die für eine O-Mannosylierung essentiellen Strukturdeterminanten und O-Mannosylierungspositionen des Neurofascins bestimmt werden (1). Neben alpha-Dystroglykan und Neurofascin werden weitere, bisher nicht charakterisierte Proteine mit O-Mannose Glykanen modifiziert sein. Durch die metabolische Azidozucker-Strategie sollen diese Targetproteine der O-Mannosyltransferase affinitäts-chromatographisch angereichert und proteomanalytisch identifiziert werden (2). Parallel werden Proteine des Mäusehirns gelelektrophoretisch aufgetrennt und durch eine neu etablierte in-Gel-Glykomik und Proteinidentifizierung nach chemischer de-O-Glykosylierung als O-mannosyliert identifiziert (3).

• DFG Programme: Research Grants