Integrierte Funktionseinheit für Mikroskopie
Final Report Abstract
Die Funktionseinheit Mikroskopie wurde für zahlreiche Projekte des Instituts für Transfusionsmedizin, sowie für verschiedene Kollaborationsprojekte verwendet. Als Beispiel sei die Analyse der Organisation der Zellpolarität von humanen hämatopoietischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSVZ) genannt: Frisch isolierte HSVZ sind klein und rund und bilden in Kultur innerhalb von wenigen Stunden eine dynamischem polarisierte Morphologie aus, die über mehrere Tage hinweg zu beobachten ist. Diese morphologische Zellpolarisierung wird von einer Umverteilung verschiedener Zelloberflächenantigene begleitet. Um diese Prozesse detailliert zu analysieren, wurden HSVZ mit verschiedenen Inhibitoren behandelt und anschließend die Auswirkung der jeweiligen Inhibitoren auf die Zellpolarität, die Verteilung der Oberflächenantigene bzw. Polaritätsmarker sowie die Motilität der Zellen analysiert. Die Analyse der morphologischen Polarität sowie der Lokalisation der Oberflächen- Polaritätsmarker erfolgte mit Hilfe der Durchlicht- bzw. Fluoreszenz-Funktion des Geräts. Zur Quantifizierung und Detail-Analyse der Motilität und Migration von HSVZ wurde zusätzlich die Mark-and- Find-Funktion des Gerätes verwendet, die mit Hilfe eines computergesteuerten, motorisierten Tisch die gleichzeitige Anfertigung von Zeitrafferaufnahmen an verschiedenen Stellen einer Zellkultur ermöglicht. Die Funktionseinheit wurde auch zur photographischen Dokumentation der Morphologie von HSVZ abgeleiteten Zellen genutzt. Sie sind Bestandteil einer Arbeit, in der wir ein neues Modell für die humane Hämatopoese entwickeln konnten. In einem laufenden Projekt studieren wir die Verteilung eines neuen CD133 Epitops und mittels Zeitrafferaufnahmen können wir zeigen, dass sich multipotente Progenitoren mit einer Rate von ca. 70% deutlich häufiger asymmetrisch teilen, als reifere CD133 positive Progenitoren (LMPP 30%; GMP 15%). Neben den Hämatopoese Projekten analysieren wir mit der Plattform Aspekte der humanen Endothelzellbiologie sowie von mesenchymalen Stammzellen. Im Rahmen von Kollaborationsprojekten wurde an der Funktionseinheit aufgenommene Bilder verwendet.
Publications
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(See online at https://doi.org/10.1038/leu.2014.41)
