Tandem-Massenspektrometer mit HPLC-Komponenten (LC-MS/MS)
Final Report Abstract
Das analytische Verfahren der Flüssig-Chromatographie gekoppelt mit Tandemmassenspektrometrie wurde genutzt, um verschiedene Analyte (Lipidmediatoren, deren Metabolite und andere Moleküle mit einer wichtigen Bedeutung in pathophysiologischen Prozessen) selektiv und sensitiv aus biologischen Proben bestimmen zu können. Die Projekte, für die das Gerät in den letzten 3 Jahren genutzt wurde, werden im Folgenden kurz dargestellt: - Bestimmung von Prostaglandinen (PG) in Zellen, Zellkulturüberstand, Plasma, Urin und Gewebe: Die Quantifizierung von PG in biologischen Proben konnte nach Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat und Gradienten-Umkehrphasenchromatographie–MS/MS durchgeführt werden. Die niedrigen physiologischen Konzentrationen benötigen eine MS-Technologie mit der höchsten Empfindlichkeit. - Bestimmung von Prostaglandinen (PG) in Immunzellen: Aufgrund der niedrigen Zahl an Immunzellen, die aus einer Maus gewonnen werden können, wurde ein Nano-LC-MS/MS Verfahren entwickelt, um die Analyten nach FACS-Sortierung in Makrophagen, T-Zellen und Mastzellen quantifizieren zu können. - Bestimmung von Nukleosiden und Nukleotiden (Triphosphate) intra- und extrazellulär: Eine LC-MS/MS Methode wurde entwickelt, um Nukleoside und deren Triphosphate analysieren zu können. Bei der publizierten Trennmethode mittels Ionenpaarreagenzien treten Störsignale auf, die die Analyse negativ beeinflussen. Aus diesem Grund wurde für die Bestimmung von Nukleosiden und Nukleotiden auf Ionenpaarreagenzien verzichtet und eine alternative Analysenmethode entwickelt. - Bestimmung von Endocannabinoiden in Plasma und Gewebe: Die biologischen Proben (besonders kritisch sind Rückenmark und Dorsalwurzelganglien) wurden mit n-Hexan/Ethylacetat extrahiert und unter umkehrphasenchromatographischen Bedingungen getrennt, bevor die Quantifizierung mit MS/MS durchgeführt werden konnte. - Bestimmung von Lipoxinen/Resolvinen in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: Diese Moleküle, die an der AUflösung einer Entzündung beteiligt sein sollen, sind strukturell mit anderen Fettsäuremetaboliten sehr ähnlich. Eine eindeutige Quantifizierung dieser Analyten erfolgt ausschließlich bei einer adäquaten chromatographischen Trennung, in der die Moleküle mit der gleichen Molekülmasse nicht eluieren. Das Problem wurde mittels chiraler Chromatographie gelöst. - Bestimmung von Lysophosphatidsäuren (LPAs) in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: Mittels Gradienten-Umkehrphasenchromatographie und einer Laufzeit von nur 7 min wurden 6 Substanzen dieser Gruppe quantifiziert. - Bestimmung von Epoxyeicosatriensäuren (EETs) und Leukotrienen (LT) in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: EETs und LTs wurden nach Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat und Gradienten-Umkehrphasenchromatographie aus den verschiedenen Matrizes bestimmt. - Bestimmung von Linolsäurederivaten in Gewebe: diese Substanzen wurden hauptsächlich aus Hautgewebe mittels Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat und Gradienten- Umkehrphasenchromatographie analysiert. - Bestimmung von Tetrahydrocannabinol (THC) und dessen Metabolite in Plasma: Im Rahmen einer klinischen Studie wurde die Bestimmung von THC und dessen Metaboliten (THC-COOH und 11-OH-THC) entwickelt. Die Sensitivität des MS/MS Systems erlaubte eine sehr schnelle Chromatographie und eine sehr hohe Empfindlichkeit.
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