TIRF-Mikroskop

• Subject Area: Basic Research in Biology and Medicine
• Term: Funded in 2011
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 194024772

Meine Arbeitsgruppe untersucht die konformationelle Dynamik ATP-getriebener molekularer Maschi-nen, die in ihren katalytischen Zyklen große (10-60 Å) Konformationsänderungen durchlaufen. In Ein-zelmolekül-FRET-Experimenten soll die Rolle dieser Konformationsänderungen für die Funktion der molekularen Maschinen untersucht werden. Einzelmolekül-FRET-Experimente geben Aufschluss über den Anteil und die globale Architektur verschiedener Konformationen in Lösung. Die Umwandlung von Konformeren auf der Millisekunden-Zeitskala kann über konfokale Mikroskopie verfolgt werden. Um die Beobachtungszeit auf Sekunden bis Minutenzeitskala zu erweitern, sind TIRF-Experimente an immobilisierten Biomolekülen erforderlich. Viele der ATP-getriebenen molekularen Maschinen ändern ihre Konformationen auf dieser Zeitskala, so dass sie die Umwandlungskinetik mittels Konfokal-FRET nicht zugänglich ist. Für TIRF-FRET auf Einzelmolekülebene wird ein TIRF-Mikroskop mit Laseranre-gung verschiedener Donor- und Akzeptorfarbstoffe und einer empfindlichen Kamera benötigt. Wesentlich für komplexe biologische Systeme ist eine alternierende Anregung von Donor und Akzeptor, die zum einen erlaubt, Moleküle mit Donor- und Akzeptorfarbstoffen zu identifizieren und die Datenanalyse auf diese zu beschränken, zum anderen wichtige Information über die Stöchiometrie in heterogenen Systemen geben kann.

• DFG Programme: Major Research Instrumentation
• Instrumentation Group: 5090 Spezialmikroskope
• Applicant Institution: Universität Münster
• Leader: Professorin Dr. Dagmar Klostermeier