Development of a biochemical assay for glycolipid flipping in the ER pathway of N-linked glycosylation

• Applicant: Dr. Christian Götz Frank
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2005 to 2009
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 21479800

Ziel ist die Entwicklung eines biochemischen Tests für die an der Membran- Biogenese beteiligten ATP-unabhängigen Flippasen, eine Klasse von Proteinen, deren Existenz bereits vor ungefähr 30 Jahren postuliert wurde, deren Aktivität aber bisher biochemisch nicht definitiv gezeigt werden konnte. Flippasen erlauben die ATP-unabhängige Reorientierung von bestimmten Lipiden in biologischen Membranen von einer Seite auf die andere. Das Protein Rft1, welches bei Eukaryonten über Speziesgrenzen konserviert ist, wurde kürzlich in Bäckerhefe als Kandidat für eine am essentiellen Prozess der Protein-NGlykosylierung beteiligte Glykolipid-Flippase identifiziert (Helenius et al., Nature 414, 2002). Mit dem nun zu entwickelnden Test soll die Hypothese, dass das Rft1-Protein tatsächlich eine Flippase ist, überprüft werden. Das Grundprinzip des Tests ist, mittels Lektinbindung die Orientierung von Glykolipiden in Membranvesikeln, welche aus vesikelbildenden Lipiden, aufgereinigtem Rft1 und markiertem Glykolipid hergestellt wurden, zu bestimmen. Die damit mögliche Charakterisierung der Flippase-Aktivität würde einen Beitrag zum Verständnis von Flippasen generell leisten.

• DFG Programme: Research Fellowships
• International Connection: USA
• Host: Professor Anant Menon, Ph.D.