Development of a biochemical assay for glycolipid flipping in the ER pathway of N-linked glycosylation
Final Report Abstract
Es wurde ein auf Lektin-Bindung basierender rekonstituierter biochemischer Test (Assay) für die Membrantranslokation (Flipping) von Man5GlcNAc2-Dolichylpyrophosphat (Man5GlcNAc2-PP-Dol) entwickelt, einem kritischen Intermediat der eukaryotischer N-Glykosylierung. Mit diesem Flippase-Assay wurde getestet ob das Rft1-Protein der Bäckerhefe, ein aus genetischen Studien stammender Flippase-Kandidat, an der Man5GlcNAc2-PP-Dol Translokation in vitro beteiligt ist. Unsere Daten unterstützen jedoch keine direkte Beteiligung von Rft1p. Damit bleibt die Man5GlcNAc2-PP-Dol Flippase weiter unidentifiziert und auch die Rolle von Rft1p weiter unklar. Die Entwicklung des neuen Flippase-Assays stellt jedoch einen ersten wichtigen Schritt hin zur biochemischen Aufreinigung der Man5GlcNAc2-PP-Dol Flippase-Aktivität dar.
Publications
- (2008) “Distinct flippases translocate glycerophospholipids and oligosaccharide diphosphate dolichols across the ER.” Biochemistry, 47(30):7937-46
Sanyal S., Frank C. G. and Menon A. K.
- (2008) “Rft1: a flippase for Man5GlcNAc2-PP-Dol?”, Nature, 454(7204):E3-4; discussion E4-5
Frank C. G., Sanyal S., Rush J. S., Waechter C. J. and Menon A. K.
