Stellenwert der long non-coding RNA CRNDE in der Pathophysiologie des thorakalen Aortenaneurysmas - eine in vitro Analyse
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Im Rahmen der DFG-Nachwuchsakademie für Herzchirurgie befasste sich dieses Projekt mit der Untersuchung der long non-coding RNA (lncRNA) CRNDE (Colorectal Neoplasia Differentially Expressed) in thorakalen Aortenaneurysmata (TAA). CRNDE ist eine lncRNA, die in abdominellen Aortenaneurysmata selektiv in glatten Gefäßmuskelzellen (VSMC) exprimiert wird. Geplant waren quantitative Expressionsanalysen mittels qPCR, fluoreszenzmikroskopische Lokalisationsbestimmungen und funktionelle Analysen unter Verwendung von life cell Imaging und einem 3D-Zellkulturmodell. Des Weiteren sollten dilatierte und nicht dilatierte TAA-Bereichen unterschieden werden. In der qPCR zeigte sich kein signifikanter Unterschied zwischen dilatiertem und nicht dilatiertem Gewebe in TAA-Proben. Daher wurde von dem ursprünglichen Plan Abstand genommen und zur Identifizierung relevanter lncRNAs im TAA scRNAseq von je 6 Gewebeproben in dilatierten und nicht dilatierten Bereichen durchgeführt. In der Analyse zeigten die lncR-NAs LINC00632 und TMEM72-AS1 eine nahezu isolierte Expression in den VSMC-Clustern mit signifikant höherer Expression im dilatierten Bereich. Quantitativ spiegelte sich dies in der qPCR wieder. Beide lncRNAs wiesen eine signifikant erhöhte Expression im dilatierten Bereich auf. Funktionelle Analysen wurden an isolierten VSMC aus TAA-Gewebe durchgeführt. Unter Verwendung von siRNAs erfolgte ein temporärer zellulärer knock-out (KO) von TMEM72-AS1 und LINC00632. Die Auswirkung des KO-Zellmodells auf die Proliferation, Migration und Apoptose wurde dann mittels life cell imaging untersucht. Sowohl LINC00632 als auch TMEM72-AS1 hemmen die Migration und Proliferation. Des Weiteren aktivieren beide lncRNAs die Apoptose. Die hier gewonnen Erkenntnissen lassen die Vermutung zu, dass sowohl TMEM72-AS1 als auch LINC00632 eine relevante Rolle in der Pathophysiolgie des thorakalen Aortenaneurysmas spielen.
