Identifizierung und Charakterisierung von Substraten und nachgeschalteten Zielproteinen der Raf-Kinasen

• Antragsteller: Dr. Josip Lovric
• Fachliche Zuordnung: Grundlagen der Biologie und Medizin
• Förderung: Förderung von 1999 bis 2003
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5153850

Raf-Kinasen sind zentrale Schalt- und Integrationselemente zellulärer Signalwege bei der Regulation von Proliferation, Differenzierung und Apoptose. Insbesondere ist das protoOnkogen raf-1 beteiligt an der Transformation von Zellen durch onkogenes ras. Es sollen Proteine identifiziert werden, die an der Transformation, der Induktion neuronaler Differenzierung sowie der Zellzyklusregulation durch Raf-Kinasen beteiligt sind, und deren Phosphorylierung in lebenden Zellen unmittelbar durch Raf-Kinasen reguliert wird. Hierzu wurden Fibroblasten und neuronale Zellen, die transformierende, Östrogen-regulierbare Varianten von Raf-1 exprimieren, metabolisch mit 32P-Orthophosphat markiert. Die zellulären Proteine wurden über zweidimensionale Elektrophoresen aufgetrennt, um die nach RafAktivierung differentiell phosphorylierten Proteine zu detektieren. Neben den bekannten Zielproteinen MEK und MAP Kinase konnten bisher 11 weitere Raf-Zielproteine über diesen Ansatz gefunden werden. Die Proteine wurden aus den Gelen isoliert und massenspektrometrisch analysiert. Durch Datenbankvergleiche konnte bereits eines der neuen Raf-Zielproteine identifiziert werden (siehe beiliegendes Manuskript). Ein wesentliches Ziel weiterer Arbeiten sind Nachweis und Identifizierung weiterer Zielproteine, sowie deren biochemische und zellbiologische Charakterisierung.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen