Analyse genomischer Bindungsstellen von Hitzeschockfaktoren durch UV-Laser-Quervernetzung in Arabidopsis thaliana

• Applicant: Dr. Ralf Prändl
• Subject Area: Plant Sciences
• Term: from 1999 to 2002
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5210410

Ziel des Forschungsprojektes ist die Analyse genomischer Bindestellen von Hitzeschockfaktoren (HSFs) in Arabidopsis thaliana. In Arabidopsis thaliana wurden bisher 16 Gene beschrieben, die für HSFs codieren. Die transgene, transiente bzw. heterologe (Über-)Expression zeigte, daß sich die HSFs in ihrer Fähigkeit zur Transkriptionsaktivierung von Hitzeschockgenen unterscheiden. Die Methode der UV-Laser-Quervernetzung soll eingesetzt werden, um Hitzeschockfaktoren in vivo mit ihren Bindestellen auf der DNA querzuvernetzen. Die kovalenten HSF-DNA-Komplexe werden durch Immunpräzipitation unter stringenten Bedingungen angereichert und durch Hybridisierungstechniken analysiert. Die Etablierung dieser leistungsfähigen Methode zur Analyse der DNA-Bindung von Proteinen in Pflanzengeweben ist ein wesentliches Ziel dieses Projektes. Die konkrete Bedeutung für die Untersuchung von HSFs liegt in der Möglichkeit differentielles Bindeverhalten der einzelnen HSFs bezüglich Promotor, Art, Intensität und Zeitdauer des Stresses zu analysieren bzw. das Assembly eines Transkriptionskompexes in vivo zu verfolgen.

• DFG Programme: Research Grants