Zelluläre und molekulare Mechanismen der Steuerung des apikalen Na+/H+-Austauschers NHE3 durch Adenosin in Nierenepithelzellen

• Applicant: Privatdozentin Dr. Corinna Helmle-Kolb
• Subject Area: Anatomy and Physiology
• Term: from 1999 to 2002
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5213230

In dem beantragten Projekt sollen die zellulären und molekularen Mechanismen der Adenosin-induzierten Steuerung von NHE3 in Nierenepithelzellen aufgeklärt werden, um damit die Frage zu beantworten, ob Adenosin als renales Autacoid die Na - und HCO3-Absorption der Niere verändert und damit zu der Konditionierung des Funktionserhaltes renalen Gewebes bei lokalen Ischaemien beiträgt. NHE3 Moleküle mit Substitutionen einzelner Aminosäuren oder C-terminalen Deletionen werden uns freundlicherweise vvon Dr. Orson Moe (Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas TX 75235-8856, USA) zur Verfügung gestellt. Ausgehend von NHE3 und NHE3 Mutanten soll in transfizierten A6 Zellen (einer Zellinie aus der Niere des Xenopus laevis) durch den Vergleich der Transporteigenschaften verschieden modifizierter Na /H -Austauscher (unter Anwendung fluoreszenz-spektroskopischer Verfahren) C-terminale Aminosäuredeterminanten identifiziert werden, die an der Adenosinantwort des Na /H -Austauschers in Abhängigkeit von der Aktivierung der Rezeptorsubtypen A1, A2 und A3 beteiligt sind. Mit der Methode der Immunpräzipitation und zweidimensionalem Phosphopeptidmapping soll geklärt werden, ob die Steuerung von NHE3 über eine Phosphorylierung verläuft. Darüber hinaus soll mit Hilfe der Biotinylierung geprüft werden, ob Adenosin NHE3 durch eine Internalisierung inaktiviert. Die Ergebnisse werden zu der Aufklärung grundlegender Regulationsmechanismen des Na /H -Austauschers in der Bürstensaummembran des proximalen Tubulusepithels in Abhängigkeit von der Aktivierung von Proteinkinasen und dadurch einer Vielzahl von Hormonen beitragen.

• DFG Programme: Research Grants
• International Connection: USA
• Participating Person: Dr. Orson Moe