Identifizierung und Modifizierung der Rezeptor-Interaktionsdomäne/n des KNOB-Proteins der adenoviralen Fiberprojektion

• Applicant: Professorin Dr. Gabriele Petersen
• Subject Area: Cell Biology
• Term: from 1999 to 2005
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5216652

Ziel des Projektes ist die Identifizierung derjenigen Bereiche und Aminosäuren der adenoviralen Fiberprojektion (KNOB), welche für die Bindung an den Coxsackie-Adenovirus-Rezeptor (CAR) notwendig sind, um die Herstellung von Vektoren zu ermöglichen, welche nicht mehr mit CAR interagieren. Dadurch kann nach entsprechender Modifikation bei einem gentherapeutischen Einsatz der adenovirale Tropismus dahingehend verändert werden, daß nur noch die Erkennung und Infektion der gewünschten Zielzellen erfolgt. Unter Erhaltung der strukturellen Integrität des KNOBS soll dessen CAR-Bindungsfähigkeit durch Mutagenese ausgewählter Aminosäuren eliminiert werden. Die Auswahl der Aminosäuren basiert auf der bekannten Struktur des KNOBS und der identifizierten Epitop-Sequenz eine neutralisierenden anti-KNOB-Antikörpers und soll unterstützt werden (i) durch die Bestimmung der Epitope weiterer Antikörper, welche die Bindung des KNOBS an den Rezeptor verhindern und (ii) durch die Identifizierung von Peptidsequenzen, welche nach Affinitätsselektion mit der extrazellulären CAR-Domäne angereichert wurden. Nach rekombinanter Expression der verschiedenen mutierten KNOBS und Charakterisierung der Rezeptorbindung in vitro sollen die gewonnenen Erkenntnisse mit Hilfe rekombinanter Adenoviren bestätigt und erweitert werden.

• DFG Programme: Research Grants