Integration des beta-Galaktosidase Gens in das Genom humaner GM1-Fibroblasten mittels HSV/AAV F-Amplikon Vektoren

• Applicant: Dr. Angelika Oehmig
• Subject Area: Virology
• Term: from 2000 to 2007
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5284028

Die limitierenden Aspekte gentherapeutischer Ansätze sind oft sowohl die Transgenkapazität des Vektors als auch die stabile Expression eines Transgens in der Zelle. Virionen des Herpes simplex Virus (HSV) Typ 1 dagegen haben als Vektoren eine Transgenkapazität von bis zu 150 kb und durch Elemente des Adeno assoziierten Virus (AAV) wiederum kann die replikative Amplifikation, spezifische Integration in das zelluläre Genom und somit stabile Expression eines Transgens ermöglicht werden. In dem geplanten Projekt soll durch Kombination von Komponenten der HSV- und AAV-Systeme im Modell der GM1-Gangliosidose das humane Gen der beta-Galaktosidase (BGAL) in das Genom von GM1-Fibroblasten integriert und dauerhaft exprimiert werden. Dabei werden F-Amplikon Konstrukte mit verschieden großen Anteilen des BGAL-Transgens, nicht kodierenden HSV-Sequenzen und mit oder ohne Anteile des AAV verwendet. Die Integration des Transgens durch homologe Rekombination am endogenen Locus oder durch ortsspezifische Insertion am AAV-Locus soll in Abhängigkeit der Amplikon-Elemente und der Größe der Transgenanteile untersucht und die Strategie für die Konstruktion von Vektoren zur Einführung und stabilen Expression eines Genes dargelegt werden.

• DFG Programme: Research Fellowships
• International Connection: USA