Klonierung von Genen und cDNAs für Proteine des Basalapparates aus Grünalgen durch Insertionsmutagenese und Verwendung von Antikörpern

• Applicant: Privatdozent Dr. Karl-Ferdinand Lechtreck
• Subject Area: Plant Cell and Developmental Biology
• Term: from 1996 to 2005
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5290684

Basalkörper/Centriolen (BK) sind Zylinder aus neun Mikrotubulitriplets. Sie sind ein häufiger Bestandteil des Centrosoms eukaryotischer Organismen. Trotz intensiver Bemühungen sind bisher nur wenige ubiquitär verbreitete centrosomale Proteine identifiziert worden (z.B. Centrin und g-Tubulin). In den letzten Jahren ist die nackte zweigeißlige Grünalge Spermatozopsis similis zu einem Modellorganismus für die Analyse eines centriolären Centrosoms geworden. Aus s. similis wurden Basalapparate (Basalkörper mit assoziierten Strukturen) gereinigt und die Präparationen elektronenmikroskopisch und hinsichtlich ihrer Proteinzusammensetzung charakterisiert. Mit Hilfe von Antikörpern werden die Bestandteile nun durch Immunogoldelektronenmikroskopie im Basalapparat lokalisiert und cDNA-Klone isoliert. Insbesondere soll auf die Identifizierung eines für die BK selbst spezifischen Proteins hingearbeitet werden. Während die Rolle der BK als Organisationszentrum für die Geißel allgemein akzeptiert ist, bleibt es umstritten, ob BK weitere essentielle Funktionen haben. Vor diesem Hintergrund soll z.B. durch die Analyse von Chlamydomonas-Mutanten oder die Beladung der Zellen mit Antikörpern, Antisense-Oligonukleotiden etc. auch die Funktion der von uns identifizierten Basalapparatproteine untersucht werden. Die Arbeiten sollen klären helfen, wie die Anzahl und Ausrichtung der am Centrom gebildeten Mikrotubuli kontrolliert wird.

• DFG Programme: Research Grants