Libraries of stationary phase promotors in gram-negative bacteria: generation, screening, and engineering analysis

• Applicant: Professor Dr. Erwin Flaschel (†)
• Subject Area: Biological Process Engineering
• Term: from 2001 to 2008
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5322796

Stationärphasepromotoren können für die Biotechnologie vollkommen neue Möglichkeiten der gezielten Genexpression in Bakterien erschließen. Um eine gerichtete Evolution von Stationärphasepromotoren durchführen zu können, die an definierte physiologische Zustände der Bakterienzelle angepasst sind, soll eine Bibliothek von synthetischen und natürlichen Stationärphasepromotoren aufgebaut werden. Nachdem zunächst ein Modellsystem zum Screening der Promotoren entwickelt worden ist, mit dessen Hilfe aus Promotorbibliotheken aussichtsreiche Promotoren selektiert werden, sollen diese einer verfahrenstechnischen Analyse in E. coli unterworfen werden, wobei das am eigenen Lehrstuhl entwickelte Sekretionssystem für heterologe Proteine in Gram-negativen Bakterien einen wesentlichen Beitrag leisten soll. Für die Studien wird ein Indikatorsystem benötigt, das die Aktivität der Promotoren anzeigt. Zu diesem Zweck soll das grün-fluoreszierende Protein aus Aequorea victoria (GFP) herangezogen werden. Generell sollen Stärke, Dichtheit (basale Transkription) und Ansprechempfindlichkeit von Stationärphasepromotoren untersucht werden. Die für E. coli erzielten Ergebnisse sind dann auf ihre Übertragbarkeit auf andere Species Gramnegativer Bakterien zu untersuchen.

• DFG Programme: Research Grants
• Participating Person: Professor Dr.-Ing. Karl Friehs