Einfluss von Adaptoren und akzessorischen Proteinen auf die Dynamik von Clathrin-abhängigen Transportvorgängen

• Applicant: Professor Dr. Ernst Ungewickell (†)
• Subject Area: Cell Biology
• Term: from 2003 to 2010
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5402851

Clathrin-bedeckte Membranvesikel sind in Eukaryoten an der Rezeptor-vermittelten Endozytose von Nährstoffen, der Internalisierung von aktivierten Signalrezeptoren und der Sortierung von lysosomalen Proteinen am TGN beteiligt. Neben Clathrin und Adaptoren wurde in den letzten Jahren eine stetig wachsende Zahl von Proteinen beschrieben, die an der Bildung von Clathrin-bedeckten Transportvesikeln bzw. an der Zerlegung des Coats beteiligt sind. Zu diesen Proteinen zählen Epsin, AP180/Calm und Hip, die sowohl mit Clathrin, AP2 und in einem Falle (Hip) auch mit dem Actin-Zytoskelett in Wechselwirkung treten. Auxilin und die Lipid Phosphatase Synaptojanin sind an der Zerlegung der Clathrinhülle, die nach der Internalisation des Vesikels stattfindet, beteiligt. Ziel des geplanten Projekts ist es, die Funktion von endozytischen Proteinen bei der Endozytose durch gezielte Hemmung ihrer Synthese (knockdown) in HeLa-Zellen mittels siRNAs (small inhibitory RNAs) zu untersuchen. Insbesondere ist vorgesehen 1. die Endozytose von Transferrin und EGF, 2. die Verteilung, Anzahl und Morphologie von Coated pits/vesicles durch Fluoreszenz- und Elektronenmikroskopie, 3. die Dynamik von Coated pits/vesicles in lebenden mit GFP-Clathrin light chain A bzw. YFP-b2-Adaptin transfizierten Zellen und 4. die Dynamik von Actin in lebenden mit GFP-Actintransfizierten Zellen nach gezielten "knockdowns" von ausgewählten endozytischen Proteinen zu untersuchen.

• DFG Programme: Research Grants