Optische Analyse dynamischer Intra- und Inter-Aktionen von signalübertragenden Proteinen in lebenden immunkompetenten Zellen

• Antragsteller: Dr. Roland Hartig
• Fachliche Zuordnung: Immunologie
• Förderung: Förderung von 2003 bis 2011
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5470521

• Erstellungsjahr: 2014

Zusammenfassung der Projektergebnisse

In Teilprojekt 8 wurde mit Hilfe eines minimal-invasiven Multiparameter Fluoreszenzlebensdauer Mikroskops für TSCSPC (Time and Space Correlated Single Photon Counting) die Stimulus-induzierte Konformationsänderung der Tyrosinkinase p56lck visualisiert. Hierzu wurde ein FRET-basierter Lck-Biosensor in Lck-defizienten Jurkat T-Zellen und primären humanen T-Zellen exprimiert. Die Stimulation erfolgte mittels löslicher Antikörper und Antigen-präsentierender Zellen. Stimulus-vermittelte Konformationsänderungen von Lck konnten so über die Änderung der FRET-Signale analysiert und orts- und zeitaufgelöst visualisiert werden.

Projektbezogene Publikationen (Auswahl)

• (2006) FRET-FLIM at nanometer spectral resolution from living cells, Optics Express 14: 12217-12229
  Nair DK, Jose M, Kuner T, Zuschratter W, Hartig R
  
• . Prokazov Y, Turbin E, Herzog A, Michaelis B, Zuschratter W, Kemnitz K (2009) Reborn quadrant anode image sensor, Nuclear Instrumentation and Methods 604: 221-223
  Prokazov Y, Turbin E, Herzog A, Michaelis B, Zuschratter W, Kemnitz K
  
• (2011) Wide-Field Multi-Parameter FLIM: long-term minimal invasive observation of proteins in living cells. PLoS One 6: e15820
  Vitali M, Picazo F, Prokazov Y, Duci A, Turbin E, Götze C, Llopis J, Hartig R, Visser AJ, Zuschratter W
  
• (2012) Desynchronisation of glycolytic oscillations in yeast cell populations. PLoS One 7: e43276
  Weber, André; Prokazov, Yury; Zuschratter, Werner & Hauser, Marcus J. B.
  
• (2013) T cell activation results in conformational changes in the Src family kinase Lck to induce its activation. Sci Signal 6(263): ra13
  Stirnweiss, Anja; Hartig, Roland; Gieseler, Steffi; Lindquist, Jonathan A.; Reichardt, Peter; Philipsen, Lars; Simeoni, Luca; Poltorak, Mateusz; Merten, Camilla; Zuschratter, Werner; Prokazov, Yury; Paster, Wolfgang; Stockinger, Hannes; Harder, Thomas; Gunzer, Matthias & Schraven, Burkhart
  
• (2014) Wide-field fluorescence lifetime imaging with multi-anode detectors. Methods Mol Biol 1076: 457-480
  Hartig, Roland; Prokazov, Yury; Turbin, Evgeny & Zuschratter, Werner