Analyse der Regulation von Kalziumkanälen durch alpha-Neurexine an "Chimären Synapsen" in vitro
Final Report Abstract
Informationsweitergabe zwischen Nervenzellen und die dazu notwendige Freisetzung von synaptischen Vesikeln hängt von der intakten Funktion präsynaptischer, spannungsabhängiger Kalziumkanäle ab. In Vorarbeiten zu diesem Projekt hatten wir berichtet, dass die synaptischen Zelladhäsionsmoleküle Neurexine essentiell für die synaptische Transmission sind, und vermutet, dass sie spannungsabhängige Kalziumkanäle regulieren können. Unklar war jedoch geblieben, ob Neurexine die Kanaleigenschaften direkt beeinflussen oder ob sie andere Effekte wie z.B. die genaue subsynaptische Lokalisierung der Kanäle beeinflussen. Im vorliegenden Projekt haben wir zunächst die wichtige Hypothese einer direkten Modulation in zwei komplementären Ansätzen getestet: (i) Wir haben heterologe Zelllinien mit definierten Ca2+ Kanälen generiert und Kalziumströme mit und ohne Co-Transfektion von Neurexin 1a gemessen. Es wurden keine signifikanten Unterschiede der Stromeigenschaften beobachet. (ii) In der Kombination von Kapazitätsmessungen und patch-clamp Elektrophysiologie haben wir in Melanotrophs der Hypophyse ebenso keine Veränderungen der Kalziumstromparameter in Neurexindefizienten Mäusen gefunden, jedoch den Neurexin-typischen Phänotyp erstmals im (neuro- )endokrinen System beobachtet. Darüberhinaus haben wir innerhalb dieses Projektes ein Protokoll für "Chimäre Synapsen" zwischen primären hippokampalen Neuronen und mit SynCAM und Neuroligin co-transfizierten HEK293 Zellen entwickelt, das als Grundlage für zukünftige funktioneile Analysen an solchen reduktionistischen Kontakten dienen kann.
Publications
- Dudanova, L, Sedej, S., Ahmad, M., Masius, H., Sargsyan, V., Zhang, W., Riedel, D., Angenstein, F., Schild, D., Rupnik, M., and Missler, M. (2006) Important contribution of aneurexins to Ca2+ -triggered release of secretory granules. J. Neurosci. 26(41), 10599- 10613.1
