Spektrales konfokales Laserscanning-Mikroskop
Final Report Abstract
Das beschaffte Gerät wurde in den vergangenen 3 Jahren als multi-user System bei der Bearbeitung verschiedenster Projekte mit unterschiedlichen methodisch-technischen Anforderungen eingesetzt: - In der Zoophysiologie (Prof. B. Walz, Prof. O. Baumann, PD Dr. W. Blenau) wurden mit Hilfe des Gerätes immunzytochemische Untersuchungen zur Verteilung von Isoformen der Na,K-ATPase in Drosophila-Augen, zur Verteilung von Serotonin-Rezeptor-Isoformen im Bienengehirn sowie zur subzellulären Lokalisation verschiedener V-ATPase-Untereinheiten in Fliegen-Speicheldrüsen durchgeführt. Des weiteren wurde das Gerät genutzt, um an Hand verschiedener Markerproteine (Zytoskelettproteine, Membranproteine) die Differenzierung von Insekten-Speicheldrüsen immunfluoreszenzmikroskopisch zu verfolgen. Schließlich wurde in time lapse-Studien die stimulus-induzierte Translokation von EGFP-markierten V- ATPase-Komponenten in Drosophila-Organen in vivo analysiert. Voraussetzung für die Durchführung diese Analysen war die Möglichkeit des Gerätes zur Spektralanalyse, die eine Trennung des spezifischen EGFP-Signales und der Autofluoreszenz gewährleistete. - In der Arbeitsgruppe Zellbiologie (Prof. R. Gräf) wurde das Gerät im Rahmen der funktionellen Analyse von Centrosom- und Mikrotubuli-assoziierten Proteinen bei Dictyostelium-Amöben für topologische Studien der subcentrosomalen Verteilung von Centrosomproteinen verwendet. Außerdem wurden Studien an Kernhüllenproteinen und Proteinen der Centrosom/Zellkern-Verbindung durchgeführt. Daneben fanden Lebenzellanalysen der Proteindynamik am Centrosom, an Mikrotubulienden und an der Kernhülle mit Hilfe der FRAP-Technik statt. - Die Arbeitsgruppe Biochemie (Prof. Z. Ignatova) hat das Gerät genutzt, um in kultivierten Zellen in vivo die Aggregatbildung von Polyglutamin-haltigen Proteinen, welche in neurodegenerative Erkrankungen impliziert sind, zu verfolgen. Des weiteren wurden Untersuchungen zur Mobilität der Aggregate verschiedener Polyglutaminproteine mittels FRAP und iFRAP sowie Immunofärbung zur Co-Lokalizationsanalyse verschiedener Proteine in den Polyglutaminaggregaten durchgeführt. - In der Arbeitsgruppe Mikrobiologie (Prof. E. Dittmann) wurde mit Hilfe des Gerätes in bakteriellen Zellen die Verteilung fluoreszenzmarkierter Cytoskelettproteine untersucht und durch time lapse sowie FRAP Experimente die Verteilungsdynamik während des Zellzykluses analysiert. - In der In der Arbeitsgruppe Biologische Physik (Prof. C. Beta) wurde das System zur Untersuchung dynamischer Prozesse im Aktin-Zytoskelett von Dictyostelium Amöben eingesetzt. Zum einen wurde die Dynamik von Aktin und Myosin nach Freisetzung von cGMP über photo-uncaging analysiert. Des weiteren wurde die Auswirkung verschiedener Inhibitoren auf die Struktur des Aktin-Zytoskeletts untersucht.
Publications
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(2009) Dictyostelium Sun1 is a dynamic membrane protein of both nuclear membranes and required for centrosomal association with clustered centromeres. Eur. J. Cell Biol. 88:621-638
Schulz I, Baumann O, Daunderer C, Samereier M, Gräf R
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(2010) Calcineurin activity augments cAMP/PKA-dependent activation of V-ATPase in blowfly salivary glands. Am J Physiol - Cell Physiol 298:C1047-C1056
Voss M, Fechner L, Walz B, Baumann O
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(2010) Characterization of the 5-HT1A receptor of the honeybee (Apis mellifera) and involvement of serotonin in phototactic behavior. Cell. Mol. Life Sci. 67:2467-2479
Thamm M, Balfanz S, Scheiner R, Baumann A, Blenau W
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(2010) Developmental changes in β-subunit composition of Na,K-ATPase in the Drosophila eye. Cell Tissue Res 340:215-228
Baumann O, Salvaterra PM, Takeyasu K
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(2010) Live cell-imaging techniques for analyses of microtubules in Dictyostelium. Methods Cell Biol 97:341-357
Samereier M, Meyer I, Koonce MP, Gräf R
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(2011) Analysis of Dictyostelium TACC reveals differential interactions with CP224 and unusual dynamics of Dictyostelium microtubules. Cell. Mol. Life Sci. 68:275-287
Samereier M, Baumann O, Meyer I, Gräf R
