Tandem-Massenspektrometer

• Fachliche Zuordnung: Medizin
• Förderung: Förderung in 2009
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 117496433

• Erstellungsjahr: 2013

Zusammenfassung der Projektergebnisse

Das analytische Verfahren der Flüssig-Chromatographie gekoppelt mit Tandemmassenspektrometrie wurde genutzt, um verschiedene Analyte (Lipidmediatoren, deren Metabolite und andere Moleküle mit einer wichtigen Bedeutung in pathophysiologischen Prozessen) selektiv und sensitiv aus biologischen Proben (Zellkulturüberständen, Gewebe oder Plasma) bestimmen zu können. Die Projekte, für die das Gerät in den letzten 3 Jahren benutzt wurde, werden im Folgenden kurz dargestellt. - Bestimmung von Prostaglandinen (PG) in Zellen: Die Quantifizierung von PG in Makrophagen aus Mausblut konnte nach Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat, aufgrund der niedrigen Zellzahl, nur mit Nano-LC-MS/MS bei maximaler Sensitivität durchgeführt werden. Außerdem wurden Prostaglandine mittels Gradienten-Umkehrphasenchromatographie-MS/MS in Plasma, Urin und verschiedenen Geweben quantifiziert. - Bestimmung von Ceramiden in Liquor: Wie in dem vorherigen Fall wurde aufgrund des niedrigen Volumens einer Liquorprobe aus der Maus (2 µL) ein Nano-LC-MS/MS Verfahren entwickelt, um die Analyten in der beschriebenen Matrix zu quantifizieren. - Bestimmung von Ribavirin-Derivaten (Mono-, Di- und Triphosphate) intra- und extrazellulär: Eine LC-MS3 Methode wurde entwickelt. Nur der Einsatz der Ionenfalle lieferte die nötige Selektivität, um die Analyten ohne vorherige chromatographische Trennung von den endogenen Uridin-Phosphaten unterscheiden zu können. - Bestimmung von Endocannabinoiden in Plasma und Gewebe: Die höchste Empfindlichkeit wird benötigt, um die niedrigen physiologischen Konzentrationen der Endocannabinoide, besonders in Rückenmark und im Dorsalwurzelganglion, bestimmen zu können. Die biologischen Proben wurden mit n-Hexan/Ethylacetat extrahiert und unter umkehrphasenchromatographischen Bedingungen getrennt, bevor die Quantifizierung mit MS/MS durchgeführt werden konnte. - Bestimmung von Lipoxinen/Resolvinen in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: „Pro-resolving“-Mediatoren dieser Lipidklasse sind wirkungsvolle und potente Substanzen. Ihre niedrigen intra- und extrazellulären Konzentrationen und das Auftreten von physiologischen Substanzen mit ähnlichen Molekular-Strukturen erfordern aufwendige chromatographische Trennungen. In diesem Fall haben wir chirale Chromatographie eingesetzt. - Bestimmung von Lysophosphatidinsäuren (LPAs) in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: Mittels Gradienten-Umkehrphasenchromatographie mit einer Laufzeit von nur 7 min wurden 6 Substanzen dieser Gruppe quantifiziert. - Bestimmung von Epoxyeicosatriensäuren (EETs) und Leukotrienen (LT) in Plasma, Gewebe und Zellkulturüberstand: EETs und LTs wurden nach Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat und Gradienten-Umkehrphasenchromatographie aus den verschiedenen Matrizes bestimmt. - Bestimmung von Linolsäurederivaten in Gewebe: diese Substanzen wurden hauptsächlich aus Hautgewebe mittels Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Ethylacetat und Gradienten-Umkehrphasenchromatographie analysiert. - Bestimmung von Tetrahydrocannabinol (THC) und Metaboliten in Plasma: Im Rahmen einer klinischen Studie wurde die Bestimmung von THC und dessen Metaboliten (THC-COOH und 11-OH-THC) entwickelt. Die Sensitivität des MS/MS Systems erlaubte eine sehr einfache Probenaufarbeitung zusammen mit einer sehr schnellen Chromatographie, dadurch wurden Lösungsmittel und Zeit eingespart.

Projektbezogene Publikationen (Auswahl)

• A pirinixic acid derivative (LP105) inhibits murine 5-lipoxygenase activity and attenuates vascular remodelling in a murine model of aortic aneurysm Br J Pharmacol. 2011 Aug;163(8):1721-32
  Revermann M, Mieth A, Popescu L, Paulke A, Wurglics M, Pellowska M, Fischer AS, Steri R, Maier TJ, Schermuly RT, Geisslinger G, Schubert-Zsilavecz M, Brandes RP, Steinhilber D
  
• Group V phospholipase A2 in bone marrow-derived myeloid cells and bronchial epithelial cells promotes bacterial clearance after Escherichia coli pneumonia J Biol Chem. 2011 Oct 14;286(41):35650-62
  Degousee N, Kelvin DJ, Geisslinger G, Hwang DM, Stefanski E, Wang XH, Danesh A, Angioni C, Schmidt H, Lindsay TF, Gelb MH, Bollinger J, Payré C, Lambeau G, Arm JP, Keating A, Rubin BB
  
• Macrophages programmed by apoptotic cells promote angiogenesis via prostaglandin E2 FASEB J. 2011 Jul;25(7):2408-17
  Brecht K, Weigert A, Hu J, Popp R, Fisslthaler B, Korff T, Fleming I, Geisslinger G, Brüne B
  
• Soluble epoxide hydrolase limits mechanical hyperalgesia during inflammation Mol Pain. 2011 Oct 4;7:78
  Brenneis C, Sisignano M, Coste O, Altenrath K, Fischer MJ, Angioni C, Fleming I, Brandes RP, Reeh PW, Woolf CJ, Geisslinger G, Scholich K
  
• The protein kinase IKKε is a potential target for the treatment of inflammatory hyperalgesia J Immunol. 2011 Sep 1;187(5):2617-25
  Möser CV, Kynast K, Baatz K, Russe OQ, Ferreirós N, Costiuk H, Lu R, Schmidtko A, Tegeder I, Geisslinger G, Niederberger E
  
• 5,6-EET is released upon neuronal activity and induces mechanical pain hypersensitivity via TRPA1 on central afferent terminals J Neurosci. 2012 May 2;32(18):6364-72
  Sisignano M, Park CK, Angioni C, Zhang DD, von Hehn C, Cobos EJ, Ghasemlou N, Xu ZZ, Kumaran V, Lu R, Grant A, Fischer MJ, Schmidtko A, Reeh P, Ji RR, Woolf CJ, Geisslinger G, Scholich K, Brenneis C
  
• Analysis of sphingolipid and prostaglandin synthesis during zymosan-induced inflammation Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2012 Oct;99(1-2):15-23
  Linke B, Schreiber Y, Zhang DD, Pierre S, Coste O, Henke M, Suo J, Fuchs J, Angioni C, Ferreiros-Bouzas N, Geisslinger G, Scholich K
  
• Lack of microsomal prostaglandin E(2) synthase-1 in bone marrow-derived myeloid cells impairs left ventricular function and increases mortality after acute myocardial infarction Circulation. 2012 Jun 12;125(23):2904-13
  Degousee N, Simpson J, Fazel S, Scholich K, Angoulvant D, Angioni C, Schmidt H, Korotkova M, Stefanski E, Wang XH, Lindsay TF, Ofek E, Pierre S, Butany J, Jakobsson PJ, Keating A, Li RK, Nahrendorf M, Geisslinger G, Backx PH, Rubin BB
  
• Site-specific and time-dependent activation of the endocannabinoid system after transection of long-range projections PLoS One. 2012;7(3):e33537
  Kallendrusch S, Hobusch C, Ehrlich A, Ziebell S, Ueda N, Geisslinger G, Koch M, Dehghani F
  
• Structure-activity relationship of nonacidic quinazolinone inhibitors of human microsomal prostaglandin synthase 1 (mPGES 1). J Med Chem. 2012 Apr 26;55(8):3792-803
  Rörsch F, Buscató E, Deckmann K, Schneider G, Schubert-Zsilavecz M, Geisslinger G, Proschak E, Grösch S
  
• Anandamide deficiency and heightened neuropathic pain in aged mice Neuropharmacology. 2013 Aug;71:204-15
  Bishay P, Häussler A, Lim HY, Oertel B, Galve-Roperh I, Ferreirós N, Tegeder I
  
• Cysteinyl leukotriene-receptor-1 antagonists interfere with PGE2 synthesis by inhibiting mPGES-1 activity Biochem Pharmacol. 2013 Jul 15;86(2):286-96
  Kahnt AS, Rörsch F, Diehl O, Hofmann B, Lehmann C, Steinbrink SD, Angioni C, Geisslinger G, Grösch S, Steinhilber D, Maier TJ
  
• Heterologously expressed formyl peptide receptor 2 (FPR2/ALX) does not respond to lipoxin A4 Biochem Pharmacol. 2013 Jun 15;85(12):1795-802
  Hanson J, Ferreirós N, Pirotte B, Geisslinger G, Offermanns S
  
• Phenotyping the function of TRPV1-expressing sensory neurons by targeted axonal silencing J Neurosci. 2013 Jan 2;33(1):315-26
  Brenneis C, Kistner K, Puopolo M, Segal D, Roberson D, Sisignano M, Labocha S, Ferreirós N, Strominger A, Cobos EJ, Ghasemlou N, Geisslinger G, Reeh PW, Bean BP, Woolf CJ
  
• Simultaneous and sensitive LC-MS/MS determination of tetrahydrocannabinol and metabolites in human plasma Anal Bioanal Chem. 2013 Feb;405(4):1399-406
  Ferreirós N, Labocha S, Walter C, Lötsch J, Geisslinger G