Massenspektrometer mit nano-HPLC und Chip Interface

• Subject Area: Medicine
• Term: Funded in 2009
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 162572700

Der unmittelbare diagnostische Einsatz der Massenspektrometrie ist bisher nicht möglich, da insbesondere bei der Untersuchung von Serumproben die Präanalytik aufgrund schlechter Standardisierung einen hohen Impakt auf MS-Profile hat, der größer ist, als die biologische oder krankheitsassoziierte Varianz. Da MS-Profile überwiegend im niedermolekularen Bereich informativ sind, werden insbesondere proteolytisch prozessierte Peptide detektiert. Zahlreiche Proteasen haben eine wichtige pathophysiologische Bedeutung bei der Progression und Metastasierung von Tumorerkrankungen. Wir haben eine Methode entwickelt, mit der sich krankheitsassoziierte Proteaseaktivität in klinischem Material einfach standardisierbar sowie spezifisch und sensitiv bestimmen lässt, um daraus diagnostische Aussagen ableiten zu können. Dabei werden Reporterpeptide in die Probe eingespikt; während einer Inkubationsphase werden diese von den Proteasen entsprechend prozessiert und es entstehen charakteristische Peptidfragmente, welche massenspektrometrisch detektiert werden können. Mit der bisher verwendete MALDI-TOF MS Analytik können aufgrund der störenden Ionensuppression nur sehr eingeschränkt Multiplex Untersuchungen gemacht werden. Die LC/MS Technologie ermöglicht die Analyse von hochdimensionalen Reporterpeptid-Gemischen, die Auswertung der Plots erfolgt wie bei der label-freien Quantifizierung und detektiert unterschiedliche Peptidmuster, welche als Surrogatmarker einer krankheitsassoziierten Proteaseaktivität dienen.

• DFG Programme: Major Research Instrumentation
• Instrumentation Group: 1700 Massenspektrometer
• Applicant Institution: Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg; Medizinische Fakultät Mannheim
• Leader: Professor Dr. Peter Findeisen