Structure and function of the ACMV geminivirus replication initiator protein

• Antragstellerin: Dr. Katharina Hipp
• Fachliche Zuordnung: Genetik und Genomik der Pflanzen
• Förderung: Förderung von 2013 bis 2018
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 240618389

Das Replikations-assoziierte Protein (Rep) der pflanzlichen Geminiviren ist ein multifunktionelles Protein, das für die Initiation der viralen Replikation durch rolling circle replication und für die Interaktion mit verschiedenen Wirtsfaktoren notwendig ist. Das Rep Protein der Geminiviren besitzt außerdem ATPase/Helikase-Funktionen. Das Rep-Protein des African cassava mosaic virus soll ektopisch in Schizosaccharomyces pombe exprimiert und für weitere Analysen aus dem Zellextrakt gereinigt werden. Die Bildung von Rep-Protein Oligomeren in Gegenwart von verschiedenen Kationen sowie Adenosinnukleotiden und DNA soll durch Elektronenmikroskopie (EM) und Größenausschlusschromatographie (SEC) untersucht werden. Diese Experimente sollen klären, ob Rep-Komplexe mit unterschiedlicher Anzahl von Monomeren existieren, die für verschiedene Funktionen des Rep-Proteins notwendig sind (z.B. endonukleolytische Spaltung für die Initiation der Replikation, Helikase). Aufbauend auf diesen Analysen sollen die dreidimensionalen Strukturen der Rep-Oligomere durch Elektronenmikroskopie und Einzelteilbildverarbeitung bestimmt werden. Die Strukturen sollen dazu beitragen, die verschiedenen Funktionen des Rep-Proteins auf einer molekularen Ebene zu verstehen.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen