Fluoreszenzmikroskop zur hochauflösenden Lokalisationsmikroskopie
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Das Forschungsgerät wird zur hochauflösenden Fluoreszenzmikroskopie nach dem Prinzip der Lokalisation einzelner Moleküle eingesetzt, (i) zur Visualisierung nano-skaliger zellulärer Strukturen sowie zur (ii) Messung der Dynamik einzelner Biomoleküle (Einzelmolekül-Tracking). In der AG SMB wird das System zur Messung der Trajektorien von Membranrezeptoren in lebenden Zellen eingesetzt. Für verschiedene Membranrezeptoren (bspw. MET-Rezeptor) konnte die Dynamik in der Membran (Diffusionstyp und –koeffizient) bestimmt, und deren Änderung bei Stimulation/Inhibition untersucht werden. Diese Experimente ermöglichen die Untersuchung zentraler Prozesse der Signalinduktion. Das Gerät N-STORM ist durch die Benutzerfreundlichkeit in einer Vielzahl vergleichbarer Projekte für uns entscheidend, da an diesem (kommerziellen) System auch nicht-Experten Messungen durchführen können. Darüber hinaus setzen wir das System in verschiedenen Imaging-Experimenten ein, bspw. zur Untersuchung und Charakterisierung neuer photoaktivierbarer Fluorophore (in Kooperation mit Prof. Alexander Heckel, Universität Frankfurt), zur Etablierung neuer Markierungstechniken sowie zur Validierung quantitativer Sonden. Das N-STORM bietet hierfür eine homogene, multispektrale Ausleuchtung, ausreichende Laserintensitäten als auch eine gute Benutzerfreundlichkeit.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
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RSC Advances, 2014, “Click chemistry facilitates direct labelling and superresolution imaging of nucleic acids and proteins”
Raulf et al.
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Angew Chem, 2015, “A set of homo-oligomeric standards allows accurate protein counting”
Finan et al.
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Chem Comm, 2017, “A new photoactivatable near-infrared-emitting QCy7 fluorophore for single-molecule super-resolution microscopy”
Klötzner et al.
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FEBS Open Bio, 2017, “Membrane dynamics of resting and internalin B- bound MET receptor tyrosine kinase studied by single-molecule tracking”
Harwardt et al.
