Dynamics of human immunodeficiency virus (HIV-1) maturation
Final Report Abstract
Ein koordinierter Ablauf der proteolytischen Virusreifung, bei der die Strukturproteine von der viralen Protease gespalten warden, ist essentiell für die Infektiösität von HIV-1. In diesem Projekt haben wir die Dynamik der proteolytischen Reifung und die Rolle einzelner Protease-Schnittstellen im Strukturprotein Gag auf diesen Reifungsprozess mit biochemischen und strukturbiologischen Methoden sowie mit Lebendzell-Fluoreszenzmikroskopie untersucht. Die detaillierte quantitative Analyse der Gag- Proteolyse im assemblierten und nicht assemblierten Zustand und nach Mutagenese einzelner Schnittstellen bildet die Grundlage für eine Modellierung der Gag Prozessierung. Wir konnten einen photolabilen Inhibitor entwickeln, der die rasche und synchronisierte Aktivierung der Protease im Inneren des Virions erlaubt. Nach Aktivierung erfolgte die Proteolyse von Gag zu den reifen Produkten, sowie eine mittels Nanoskopie sichtbar gemachte Umlagerung von Spaltprodukten im Partikel mit einer Halbwertszeit von ~30 min; diese Ergebnisse definieren eine Obergrenze für die Zeitdauer der HIV-1 Reifung. Schliesslich haben wir fluoreszierende Sensoren entwickelt, die es uns ermöglichen, die Proteolyse von Gag sowie die Bildung von reifer Protease an sich bildenden Virusknospen an der Zellmembran direkt mittels zeitaufgelöster Fluoreszenzmikroskopie zu verfolgen.
Publications
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Mattei, S., Tan, A., Glass, B., Müller, B., Kräusslich, H.G., and Briggs, J.A.G.
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