Generierung spezifischer Mutationen für dilatative versus hypertrophe Kardiomyopathie in isogenen humanen induzierten pluripotenten Stammzellen zur Verwendung als Krankheitsmodell und zur Analyse molekularer Signalwege
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Hypertrophe Kardiomyopathie (HCM) tritt mit einer Prävalenz von 1:500 in der allgemeinen Bevölkerung auf. Die zugrunde liegenden Mutationen betreffen häufig das Gen für Myosin bindendes Protein C3 (MYBPC3), oft führen dabei die Mutationen zu einem frühen stop-codon (PTC) in der mRNA vom betroffenen Allel. Die molekularen Mechanismen, wie die Mutationen zur Krankheitsentstehung führen, sind jedoch nur sehr unvollständig bekannt. Um diese in einem Modell mit humanen Kardiomyozyten zu untersuchen, wurden in dieser Studie induzierbare, pluripotente Stammzellen (iPSC) von HCM-Patienten mit MYBPC3 PTC Mutation generiert. Die jeweiligen Mutationen wurden mittels Genom-Editierung korrigiert, so dass Paare isogener iPSC-Linien entstanden, die sich nur in der Mutation unterscheiden. Nachfolgend wurden diese iPSCs zu Kardiomyozyten (iPSC-CMs) differenziert, und strukturell, funktionell, sowie in Hinblick auf molekulare Dysregulationen untersucht. Während in diesen isogenen Vergleichen keine signifikanten strukturellen Unterschiede oder Veränderungen in der Kontraktilität nachweisbar waren, zeigten sich in den HCM iPSC-CMs pathophysiologisch relevante Einschränkungen in der Kalziumhomeostase. Zudem konnte eine molekulare HCM-Signatur auf Genexpressionsebene herausgearbeitet werden; Signalkaskaden kardialer Stressregulation, Hypertrophy, Kalziumregulation und mechanischer Signaltransduktion wiesen auf die Ausbildung eines HCM Phänotyps hin. Vor allem aber zeigte sich eine Überaktivierung von Genregulationskaskaden, die in der Proteinentstehung (Translation) eine bedeutende Kontrollfunktion haben. Insbesondere nonsense-mediated decay (NMD), ein Signalweg zur Überwachung korrekter Translation, der durch PTC Mutationen aktiviert wird, stellte sich in den HCM iPSC-CMs als überaktiviert dar. Eine Inhibition der Aktivität von NMD in HCM iPSC-CMs führte zu einer signifikanten Abschwächung des Kalzium-Phänotyps sowie weitgehender Normalisierung der molekularen HCM-Signatur. Zusammengenommen zeigt diese Studie, dass die Kombination von iPSC-CMs mit Genom-Editierungen ein brauchbares Model mit humanen Kardiomyozyten zur Erforschung von HCM ist. Die vorgestellten Ergebnisse weisen auf eine direkte Beteiligung von NMD in der frühen Entstehung von HCM hin. Weitere Untersuchungen können hier zu einem detaillierteren Verständnis der direkten Verbindung von überaktiviertem NMD bei MYBPC3 PTC Mutationen zu der Ausbildung eines HCM Phänotyps führen. Potentiell kann hieraus ein neuer, spezifischer Therapieansatz zur Behandlung bei HCM entwickelt werden.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
- (2019) A Premature Termination Codon Mutation in MYBPC3 Causes Hypertrophic Cardiomyopathy via Chronic Activation of Nonsense-Mediated Decay. Circulation 139 (6) 799–811
Seeger, Timon; Shrestha, Rajani; Lam, Chi Keung; Chen, Caressa; McKeithan, Wesley L.; Lau, Edward; Wnorowski, Alexa; McMullen, George; Greenhaw, Matthew; Lee, Jaecheol; Oikonomopoulos, Angelos; Lee, Soah; Yang, Huaxiao; Mercola, Mark; Wheeler, Matthew; As
(Siehe online unter https://doi.org/10.1161/circulationaha.118.034624) - A Comprehensive TALEN-Based Knockout Library for Generating Human-Induced Pluripotent Stem Cell-Based Models for Cardiovascular Diseases. Circ Res. 2017 May 12;120(10):1561-1571
Karakikes I, Termglinchan V, Cepeda DA, Lee J, Diecke S, Hendel A, Itzhaki I, Ameen M, Shrestha R, Wu H, Ma N, Shao NY, Seeger T, Woo N, Wilson KD, Matsa E, Porteus MH, Sebastiano V, Wu JC
(Siehe online unter https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.116.309948) - Cardiac Remodeling and Regeneration. Chapter 30; Section 4, Cell Biology of Cardiac Impulse Initiation and Propagation. In: Cardiac Electrophysiology: From Cell to Bedside, 7th Edition. Zipes, Jalife, Stevenson; 2017
Seeger T, Chen C, Karakikes I, Wu JC
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Termglinchan V, Seeger T, Chen C, Wu JC, Karakikes I
(Siehe online unter https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6588-5_4) - Genome Editing in Cardiovascular Biology. Circ Res. 2017 Mar 3;120(5):778-780
Seeger T, Porteus M, Wu JC
(Siehe online unter https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.116.310197) - Telomere shortening is a hallmark of genetic cardiomyopathies. Proc Natl Acad Sci USA. 2018 Sep 11;115(37):9276-9281
Chang ACY, Chang ACH, Kirillova A, Sasagawa K, Su W, Weber G, Lin J, Termglinchan V, Karakikes I, Seeger T, Dainis AM, Hinson JT, Seidman J, Seidman CE, Day JW, Ashley E, Wu JC, Blau HM
(Siehe online unter https://doi.org/10.1073/pnas.1714538115)
