Untersuchung der Umlagerung von holo-TFIID mittels Cross-linking/Massenspectrometrie

• Antragstellerin: Dr. Therese Thuy Dung Dau
• Fachliche Zuordnung: Strukturbiologie
• Förderung: Förderung von 2017 bis 2019
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 396403853

Coaktivator-Komplexe wie der Transkriptionsfaktor IID (TFIID) beeinflussen die Transkription in dem sie einerseits mit der Hauptmaschinerie der Transkription und regulatorischen Elementen interagieren und andererseits Chromatin modifizieren. Neuesten Studien zur Folge übersetzt TFIID diese Signale in Konformationsänderungen welches letztlich zu einer Umlagerung von TFIID nach Bindung der DNA führt. Aufgrund der Flexibilität und Größe (Megadalton Bereich) von TFIID konnte bisher noch keine hochaufgelöste Struktur von TFIID akquiriert werden.Das Gastlabor hat einen neuen Ansatz etabliert der Cross-linking und Massenspektrometrie kombiniert (CLMS) um Strukturdaten von Proteinen und deren Komplexe in Lösung zu ermitteln. Diese Methode eignet sich insbesondere um strukturelle Veränderungen in einer komplexen Umgebung zu verfolgen. Integrative Strukturbiologie kombiniert Cross-linking/Massenspektrometrie, Cryo-Elektronenmikroskopie und Kristallographie und wird hier zur Verbesserung der Auflösung bei der Strukturanalyse von TFIID eingesetzt. Komplementiert wird dies durch die Analyse von TFIID-Komplexen in deren nativer Umgebung. Die TFIID-Komplexe werden direkt in der Zelle vernetzt um den Verlust von schwachen Interaktionen, Umlagerungen aufgrund der biochemischen Proteinreinigung oder Artefakte von der rekombinanten Expression zu vermeiden. Mein Ziel ist es einen zentralen Schritt in der Kontrolle von Transkription zu studieren und eine neue hochmoderne Methode zu lernen. Strukturanalysen in der Zelle mit den Technologien, welche in meinem Projekt implementiert werden, haben das Potential das Feld der Strukturbiologie entscheidend zu verändern. Sie erlauben die Migration von Strukturanalysen in sehr restriktiven in vitro Konditionen zu nativeren Konditionen.

• DFG-Verfahren: Forschungsstipendien
• Internationaler Bezug: Großbritannien
• Gastgeber: Professor Dr. Juri Rappsilber