Entwicklung bispezifischer Einzelketten-Antikörper (scFv) zur Anreicherung endothelialer Progenitorzellen (EPC) am atherosklerotischen Gefäßendothel.
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Ziel des Forschungsprojektes war die Entwicklung bispezifischer Einzelketten-Antikörper (scFv) zur Anreicherung im Blutstrom zirkulierender endothelialer Progenitorzellen (EPC) am atherosklerotischen Gefäßendothel. Zur Herstellung der bispezifischen scFv wurden die cDNA für jeweils zwei unterschiedliche scFv im Tandemformat hintereinander fusioniert. Anschließend wurde das Protein in einem Insektenzellkultursystem exprimiert und für die funktionelle Testung aufgereinigt. Es konnten erfolgreich bispezifische scFv entwickelt werden, die eine stabile Adhäsion von Maus-EPCs an aktivierte Thrombozyten (GP llb/llla) sowie aktivierte Endothelzellen (VCAM-1) ermöglichen. Als Zielmolekül auf den Maus-EPCs wurde hierbei das Stammzell-Antigen-1 (Sca1) venwendet. Für humane EPCs wurde ein bispezifischer scFv entwickelt, der über das Oberflächenantigen CD34 human EPCs an aktivierte Thrombozyten (GP llb/llla) adhärieren ließ. Die in vitro Testung konnte erfolgreich abgeschlossen werden. Für die in vivo Testung wurde ein Intravitalmikroskopie Modell etabliert, das die Echtzeitbeobachtung der Adhäsion GFP-positiver Maus-EPCs am Gefäßendothel erlaubt. Die in vivo Testung dauert derzeit an, hat aber bereits die erwarteten positiven Teil-Ergebnisse erbracht. Nach Abschluss der Testungen sollen die bispezifischen scFv als neue Therapeutika für die Behandlung atherosklerotischer Erkrankungen weiterentwickelt werden. Eine Kommerzialisierung der neu entwickelten bispezifischen scFv in Zusammenarbeit mit der forschenden Pharmazeutischen Industrie Entwicklung wird angestrebt mit dem Ziel der weiteren klinischen Entwicklung dieser bispezifischen scFv.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
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Direct thrombin inhibition with bivalirudin as an antithrombotic strategy in general and interventional cardiology. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 2007 Aug;3(4):609-20
Ahrens I, Smith BK, Bode C, Peter K
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Factor Xa-inhibition in interventional cardiology Hamostaseologie. 2007 Dec;27(5):328-32
Ahrens I, Peter K, Bode C
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(2008). Genetic transfer of fusion proteins effectively inhibits VCAM-1-mediated cell adhesion and transmigration via inhibition of cytoskeletal anchorage. J Cell Mol Med. 2008 Jun 27
Hagemeyer CE, Ahrens I, Bassler N, Dschachutaschwili N, Chen YC, Eisenhardt SU, Bode C, Peter K
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Functionalized magnetic resonance contrast agent selectively binds to glycoprotein llb/llla on activated human platelets under flow conditions and is detectable at clinically relevant field strengths. Mol Imaging. 2008 Mar-Apr;7(2):59-67
von Zur Muhlen C, von Elverfeldt D, Choudhury RP, Ender J, Ahrens I, Schwarz M, Hennig J, Bode C, Peter K
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Humanizing mouse thrombi. Nat Biotechnol. 2008 Jan;26(1):62-3
Ahrens I, Peter K
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Selenium supplementation induces metalloproteinase-dependent L-selectin shedding from monocytes. J Leukoc Biol. 2008 Jun;83(6):1388-95
Ahrens I, Ellwanger C, Smith BK, Bassler N, Chen YC, Neudorfer I, Ludwig A, Bode C, Peter K
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Therapeutic integrin inhibition: allosteric and activation-specific inhibition strategies may surpass the initial ligand-mimetic strategies. Thromb Haemost. 2008 May;99(5):803-4
Ahrens I, Peter K
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Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein on activated platelets localizes inflammation to atherosclerotic plaques. Circ Res. 2009 Jul 17;105(2):128-37
Eisenhardt SU, Habersberger J, Murphy A, Chen YC, Woollard KJ, Bassler N, Qian H, von Zur Muhlen C, Hagemeyer CE, Ahrens I, Chin-Dusting J, Bobik A, Peter K
