Die Rolle der RBM47 Inaktivierung während Progression des Kolorektalkarzinoms

• Antragsteller: Professor Dr. Heiko Hermeking
• Fachliche Zuordnung: Pathologie ; Gastroenterologie ; Hämatologie, Onkologie
• Förderung: Förderung von 2021 bis 2024
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 463909004

Wir haben zuvor das RNA-Bindungsmotivprotein 47 (RBM47) als mutmaßlichen Inhibitor der Metastasierung von Darmkrebs (CRC) identifiziert: Eine niedrige RBM47-Expression war signifikant mit einem mesenchymalen Status von Zellen, Lebermetastasierung und einem schlechten Überleben verbunden. Eine erhöhte RBM47-Expression, die in normalen Darmepithelien und Primärtumoren gefunden wurde, war jedoch mit einem Epithel-ähnlichen Zustand verbunden. siRNA-vermittelte Inhibition von RBM47 führte zu einer Induktion von EMT, Migration, Invasion und in xenotransplantierten CRC-Zellen zur Bildung von Metastasen. Die Transkriptionsfaktoren SNAIL und SLUG unterdrückten die RBM47-Expression. Hier soll die Rolle und Funktion von RBM47 in einem genetischen Mausmodell für metastasiertes CRC untersucht werden. In diesem Mausmodell ist die RBM47-Expression im normalen Dickdarm am höchsten, in nicht-invasiven CRCs verringert und in invasiven CRCs und in Lebermetastasen am niedrigsten. Wir planen zu untersuchen, ob eine intestinale, Epithelzell-spezifische Deletion von Rbm47 die Inzidenz von Fernmetastasen bei diesen Mäusen erhöht. Darüber hinaus werden wir ein orthotopisches Transplantationsmodell untersuchen, das aus von Patienten stammenden CRCs besteht, die in NOD/SCID/gamma (NSG) Mäuse injiziert werden. Dieser Ansatz rekapituliert die gesamte Adenom/Adenokarzinom/Lebermetastasierungs-Sequenz der CRC-Progression. Es sollen humane CRC-Tumoroide mit Knockout oder ektopischer Expression von RBM47 mittels Endoskopie in die Dickdarmwand von NSG-Mäusen injiziert werden und die Bildung von Primärtumoren und Metastasen untersucht werden. Um nachgeschaltete Mediatoren der RBM47-Funktionen bei der CRC-Metastasierung zu identifizieren, werden wir Tumoroide, die aus Primärtumoren und Metastasen der vorgenannten Mausmodelle isoliert wurden, einer NGS Analyse unterwerfen. Dies wird eine umfassende Analyse der RBM47-regulierten RNA-Expression, -Editierung und des alternativen Spleißens ermöglichen. Darüber hinaus werden wir zusätzliche transkriptionelle- und post-transkriptionelle Regulatoren der Epithel-spezifischen Expression von RBM47 untersuchen. Unsere bioinformatische Analyse identifizierte den Transkriptionsfaktor FOXA1, mehrere miRNAs sowie CpG-Methylierung als potenzielle Regulatoren der epithelialen RBM47-Expression. Diese potenziellen Regulatoren sollen validiert und in Zelllinien und CRC-Patientenmaterial unter Verwendung von Multiplex-Immunhistologie und Methylierungs-spezifischer PCR weiter untersucht werden. Zudem soll die potentielle Assoziation der Proteinexpression von RBM47, seiner nachgeschalteten Effektoren, sowie der RBM47-Promotor-Methylierung mit der Bildung von Fernmetastasen, dem Patientenüberleben und der Tumorprogression in drei verschiedenen CRC-Patientenkohorten analysiert werden. Die hier erzielten Ergebnisse sollen zu einem besseren Verständnis der CRC-Progression beitragen sowie Prognosemarker und therapeutische Interventionspunkte identifizieren.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen