Funktionelle und phänotypische Charakterisierung von Peptid-spezifischen PLZF+ innate-like T-Zellen

• Antragsteller: Dr. Hristo Georgiev
• Fachliche Zuordnung: Immunologie
• Förderung: Förderung seit 2022
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 470136623

Peptid-spezifische PLZF+ innate-like (PIL) T-Zellen sind eine kürzlich beschriebene Untergruppe der T-Zellen, die Charakteristika des angeborenen Immunsystems aufweisen. Ähnlich wie invariante natürliche Killer-T-Zellen (iNKT) werden PIL-T-Zellen von doppelt positiven (DP) Thymozyten positiv selektiert und differenzieren sich während ihrer Entwicklung im Thymus in drei funktionelle Effektor-Subgruppen. Im Gegensatz zu iNKT-Zellen, die Lipidantigene erkennen, erkennen PIL-T-Zellen Peptidantigene.Im Rahmen einer kürzlich durchgeführten Studie haben wir eine neue transgene Mauslinie generiert, die eine spezifische Expansion von PIL-T-Zellen unter Steady-State Bedingungen ermöglicht. Diese Studie klärte Mechanismen der Selektion von PIL-T-Zellen auf, hatte jedoch weder eine tiefgreifende Analyse der Diversität innerhalb des T-Zell-Rezeptor (TZR)-Repertoires von PIL-T-Zellen noch die Untersuchung von essentielle(n) Funktion(en), die diese Zellen unter Steady-State- oder Krankheitsbedingungen vermitteln, zum Ziel.In diesem Projekt werden wir Hochdurchsatz-Einzelzell-TZR-Sequenzierung sowie Transkriptomanalysen von sortierten PIL-T-Zellen durchführen, die uns erlauben, die Entwicklungswege von PIL-T-Zellen zu identifizieren, PIL-T-Zellen auf Transkriptomebene mit iNKT-Zellen zu vergleichen und die Vielfalt innerhalb des TCR-Repertoires von PIL-T-Zellen zu untersuchen. Diese Daten werden hilfreich sein, um TZR-Klone zu identifizieren, die gehäuft im PIL-T-Zell-Pool vorhanden sind. Mit Hilfe von retrogenen Mäusen werden wir des Weiteren untersuchen, ob die gezielte Expression einzelner dieser identifizierten TZR-Klone die Entwicklung von Thymozyten in Richtung der PIL-T-Zellen fördert. Darüber hinaus werden wir eine Reihe von NFAT-GFP-Reporterzelllinien etablieren, die ausgewählte PIL-T-Zell-TZR-Sequenzen exprimieren. Wir werden dieses System nutzen, um in vitro Antigen-präsentierende Zellen aus verschiedenen Geweben auf Antigenerkennung zu screenen. Diese Experimente werden uns dabei helfen, die systemische Verteilung und Häufigkeit von mutmaßlichen Peptidantigenen aufzuklären, die an der Selektion und Aktivierung von PIL-T-Zellen beteiligt sind. Schließlich werden wir die Verteilung und Lokalisation der PIL-T-Zellen in den peripheren Organen bestimmen und ihre potenzielle Anti-Tumor-Funktion in einem Melanom-Tumormodell untersuchen. Durch die Analyse der infiltrierenden Lymphozyten werden wir Erkenntnisse darüber gewinnen, ob PIL T-Zellen solides Tumorgewebe infiltrieren und ob sie lokale Anti-Tumor-Immunantworten modulieren können.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen