DNA-Doppelstrangbruch-Reparatur mittels nichthomologer End-Verknüpfung und die Entstehung von Chromosomenaberrationen

• Applicant: Dr. Petra Pfeiffer
• Subject Area: Basic Research in Biology and Medicine
• Term: from 1999 to 2004
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5194600

Die molekularen Ursachen der Entstehung von Chromosomenaberrationen sind noch weitgehend ungeklärt. In Säugerzellen werden DNA-Doppelstrangbrüche (DSB) hauptsächlich über direkte Verknüpfung der Enden (nichthomologes end-joining: NEJ) repariert, einem Mechanismus, der vermutlich ein besonderes Potential zur Fehlreparatur und Fehlverknüpfung von Chromosomenbruchstücken besitzt. Es sollen Faktoren untersucht werden, die für die richtige oder falsche Endverknüpfung verantwortlich sind und die Entstehung von Chromosomenaberrationen beeinflussen. Zu diesem Zweck soll eine Rekombinationskassette mit Schnittstellen für die selten schneidende I-SceI-Endonuklease in das Xgekoppelte HPRT-Gen verschiedener CHO-Hamsterzellinien mit definierten Defekten in der NEJ-vermittelten DSB-Reparatur integriert werden. Die Kassette ist so konzipiert, daß sie nach DSB-Induktion in der Zelle mit der I-SceI-Nuklease eine Unterscheidung zwischen NEJ und homologer Rekombination (HR) auf molekularer Ebene erlaubt. Lokalisierung der Kassette auf dem X-Chromosom mittels FISH-Analyse ermöglicht die Untersuchung der Beteiligung der I-SceI-induzierten DSB an der Entstehung verschiedener Aberrationstypen, was zum Verständnis der Bedeutung von NEJ und HR für die Entstehung von Chromosomenaberrationen beitragen kann.

• DFG Programme: Research Grants
• Participating Person: Professor Dr. Günter Obe