Lineares Ionenfallen Massenspektrometer
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Ein zentraler Arbeitsschwerpunkt am Institut für Funktionelle Genomik der Universität Regensburg ist die Entwicklung und Anwendung analytischer Methoden für metabolomische Untersuchungen, welche für eine Vielzahl biomedizinischer Fragestellung von großer Relevanz sind. Das 4000 QTRAP LC-MS/MS System wird vorwiegend für diese Untersuchungen genutzt. So wurden nachweisstarke quantitative Methoden zur Bestimmung von Aminosäuren basierend auf iTRAQ oder Derivatisierung mit Propylchloroformat, RP-HPLC Trennung, Elektrosprayionisierung und Detektion im MRM Modus entwickelt. Ferner wurde eine Methode zur Bestimmung von Metaboliten des Methionin- und Polyaminstoffwechsels entwickelt um die metabolischen Konsequenzen eines Verlustes der Expression der Methylthioadenosin-Phosphorylase (MTAP) in Tumoren und bei der nichtalkoholischen Steatohepatitis zu untersuchen. Unter Verwendung stabiler isotopenmarkierter Substrate wird die Aktivität ausgewählter Schlüsselenzyme, wie z.B. MTAP und Ornithindecarboxylase (ODC) bestimmt. Es wurde weiterhin eine nachweisstarke Methode zur Bestimmung von Tryptophanabbauprodukten entlang des Kynurenin-Stoffwechselweges entwickelt, die zur Untersuchung von immunregulatorischen Mechanismen bei der Graftversus-Host-Krankheit (GvHD) eingesetzt wird. Schließlich wurde eine Methode für die Analyse von Intermediaten des zentralen Kohlenstoffwechsels implementiert, die auch für metabolische Flussanalysen unter Verwendung stabiler Isotopen markierter Substrate verwendet wird. Mit dieser Methode wurde eine Inhibition der Glykolyse in Monozyten durch Milchsäure, die von Tumoren freigesetzt wird, gezeigt, welches zum Immune Escape von Tumoren beiträgt.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
- Quantitative analysis of 5'-deoxy-5'-methylthioadenosine in melanoma cells by liquid chromatography-stable isotope ratio tandem mass spectrometry. (2008) J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 876:123
Stevens, Dettmer, Wallner, Bosserhoff, Oefner
- Urinary metabolite quantification employing 2D NMR spectroscopy. (2008) Anal Chem 80:9288
Gronwald, Klein, Kaspar, Fagerer, Nurnberger, Dettmer, Bertsch, Oefner
- Direct and tumor microenvironment mediated influences of 5'-deoxy-5'-(methylthio)adenosine on tumor progression of malignant melanoma. (2009) J Cell Biochem 106:210
Stevens, Spangler, Wallner, Kreutz, Dettmer, Oefner, Bosserhoff
- Urinary amino acid analysis: A comparison of iTRAQ® –LC–MS/MS, GC–MS, and amino acid analyzer. (2009) J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 877:1838
Kaspar, Dettmer, Chan, Daniels, Nimkar, Daviglus, Stamler, Elliott, Oefner
- Lactic acid and acidification inhibit TNF secretion and glycolysis of human monocytes. (2010) J Immunol 184:1200
Dietl, Renner, Dettmer, Timischl, Eberhart, Dorn, Hellerbrand, Kastenberger, Kunz-Schughart, Oefner, Andreesen, Gottfried, Kreutz
- Quantification of intermediates of the methionine and polyamine metabolism by liquid chromatography-tandem mass spectrometry in cultured tumor cells and liver biopsies. (2010) J Chromatogr A 1217:3282
Stevens, Dettmer, Kirovski, Samejima, Hellerbrand, Bosserhoff, Oefner
- Deficient tryptophan catabolism along the kynurenine pathway reveals that the epididymis is in a unique tolerogenic state. (2011) J Biol Chem 286:8030
Jrad-Lamine, Henry-Berger, Gourbeyre, Damon-Soubeyrand, Lenoir, Combaret, Saez, Kocer, Tone, Fuchs, Zhu, Oefner, Munn, Mellor, Gharbi, Cadet, Aitken, Drevet
- Down-regulation of methylthioadenosine phosphorylase (MTAP) induces progression of hepatocellular carcinoma via accumulation of 5'-deoxy-5'- methylthioadenosine (MTA). (2011) Am J Pathol 178:1145
Kirovski, Stevens, Czech, Dettmer, Weiss, Wild, Hartmann, Bosserhoff, Oefner, Hellerbrand
