Klonierung von humanen hochaffinen Antikörperfragmenten durch Phagen Display zur intrazellulären Immunisierung gegen das Hepatitis C Virus

• Antragsteller: Privatdozent Dr. Tobias Heintges
• Fachliche Zuordnung: Gastroenterologie
• Förderung: Förderung von 2000 bis 2006
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5246988

Die variablen Domänen von humanen Antikörpern eines chronisch mit HCV infizierten Patienten sollen in Form von Einzelkettenfragmenten als Bibliothek kloniert werden. Die Antikörperfragmente der Bibliothek werden als Fusionsproteine auf der Oberfläche von Bakteriophagen exprimiert (Phage Display). Die Phagen, die hochaffine Antikörper exprimieren, können durch mehrere Zyklen einer Affinitätsselektion (Panning) mehr als millionenfach angereichert werden. Die cDNA, die die humanen variablen Antikörperdomänen kodiert, kann von den selektionierten Phagen isoliert und sequenziert werden. Anschließend können die klonierten, hochaffinen Antikörper als lösliche Fab-Fragmente oder als Einzelketten-Fv-fragment exprimiert werden. Die Antikörperfragmente sollen dann in einem Screeningverfahren auf Inhibition der Funktion von HCV Core, NS3-Protease und NS3-Helikase getestet werden. Inhibitorische Antikörperfragmente sollen anschließend durch die intrazelluläre Antigen-Antikörperbindung die essentiellen Virusproteine Core und NS3-Proteinase/Helikase inhibieren (intrazelluläre Immunisierung). Mit geeigneten Vektoren könnte die cDNA der hochaffinen, inhibitorischen Einzelkettenantikörper zur Gentherapie der Hepatitis C Virusinfektion verwendet werden. Die Untersuchung erfolgt auch mit dem Ziel, von der Struktur der inhibitorischen Antikörper Hinweise für das Design von kleinmolekularen Proteaseinhibitoren zu erhalten.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen