Untersuchungen zum Dithol-Disulfid Gleichgewicht und zur Funktion von Metallionen in der Protein-Phosphatase Calcineurin

• Applicant: Dr. Ralf Bogumil
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2000 to 2003
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5248948

Die Proteinphosphatase Calcineurin (CaN) ist in den letzten Jahren in das Zentrum intensiver Forschungen gerückt, da ihre Funktion bei der Aktivierung von T-Zellen und ihre wichtige Rolle bei einer Vielzahl anderer zellulärer Prozesse nachgewiesen wurde. In einigen kürzlich publizierten Artikeln wurde gezeigt, daß die Aktivität des Enzyms in zellulären Systemen durch Redoxreagentien moduliert werden kann. Wir haben die Inaktivierung von isoliertem CaN aus Rinderhirn mit Wasserstoffperoxid und mit Phenylarsenoxid untersucht und haben zeigen können, daß die Inaktivierung über die reversible Bildung einer Disulfid-Brücke verläuft und daß die Oxidoreduktase Thioredoxin eine effiziente Reaktivierung bewirkt. In dem vorliegenden Forschungsvorhaben soll dieses Dithiol-Disulfid Gleichgewicht im CaN weiter charakterisiert werden. Die an der postulierten Disulfidbrücke beteiligten Cysteine sollen mit Massenspektrometrie/HPLC identifiziert werden und durch ortsspezifische Mutagenese ausgetauscht werden. Das Ziel ist, ein nicht redoxreguliertes CaN zu erhalten, das dann später in vivo in vergleichenden zellbiologischen Studien eingesetzt werden kann. Im weiteren soll die ungeklärte Funktion von zweiwertigen Metallionen, die zusätzlich zum Fe-Zn-Zentrum an das Protein binden können, durch Einsatz von spektroskopischen und kinetischen Methoden untersucht werden.Anmerkung der Geschäftsstelle: Dr. Ralf Bogumil ist ausgeschieden, das Projekt wird fortgeführt von Prof. Dr. Volker Ullrich

• DFG Programme: Research Grants