Klonierung der Sialat-8-O-Methyltransferase aus dem Seestern Asterias rubens

• Applicant: Privatdozent Dr. Lee Shaw
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2000 to 2003
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5265568

Die 8-O-Methylierung stellt eine ungewöhnliche, soweit bekannt nur auf den Seestern beschränkte enzymatische Derivatisierung der Sialinsäuren dar. Die Sialat-8-O-Methyltransferase, ein S-Adenosylmethionin- und Mn2+-abhängiges Enzym, wurde in dieser Arbeitsgruppe aus dem Seestern Asterias rubens gereinigt und charakterisiert. In dem beantragten Vorhaben soll die für dieses Enzym kodierende cDNA kloniert und sequenziert werden. Hierfür soll zuerst genügend Methyltransferase isoliert werden, um eine Teilsequenzierung von Peptiden zu ermöglichen. Die gewonnene Information wird zur Herstellung einer Sonde verwendet, die zur Durchsuchung einer cDNA-Bibliothek nach 8-O-Methyltransferase-kodierenden cDNA-Klonen eingesetzt wird. Potentielle Klone werden durch DNA-Sequenzierung und rekombinante Expression in geeigneten Wirtszellen identifiziert. Anhand der abgeleiteten Aminosäureseqzenz sollen durch Vergleiche mit anderen Methyltransferasen funktionell wichtige Primärstrukturbereiche identifiziert werden. Das rekombinante Enzym soll eingehend untersucht werden, um weitere Einblicke in die Biochemie und die Biosynthese von 8-O-methylierten Sialinsäuren zu gewinnen.

• DFG Programme: Research Grants
• Participating Person: Professor Dr. Roland Schauer (†)