5-Laser Durchflusszytometer

• Fachliche Zuordnung: Mikrobiologie, Virologie und Immunologie
• Förderung: Förderung in 2023
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 528116426

Die Durchflusszytometrie stellt eine leistungsfähige Analysemethode individueller Zellen dar. Hierfür werden Zellen mit einer Vielzahl möglicher Fluorophore markiert und anschließend in vereinzelter Form optisch über laserinduzierte Fluoreszenz analysiert. Die Leistung der Durchflusszytometrie erwächst einerseits aus der Vielzahl von Fluorophor-basierten Möglichkeiten der Zellmarkierung - von der antikörperbasierten Markierung von Oberflächen- und intrazellulären Proteinen und Nukleinsäuren über die Aufnahme Fluorochrom-gekoppelter Metabolite bis zu genetisch codierten Markern für bestimmte Zellzustände, wie Zellzyklus, -tod oder Alter. Andererseits erlaubt die Methode die Analyse komplexer Zellpopulationen in sehr kurzer Zeit. Aus diesem Grund hat sich die Durchflusszytometrie zu einer Standardmethode vor allem in der zellulären und molekularen Immunologie, aber auch in angrenzenden Gebieten der Zellbiologie und Physiologie entwickelt, deren instrumenteller Fortschritt mit einer zunehmend detaillierten Unterteilung von Zellen und deren Eigenschaften einhergehen muss. Hier wird ein analytisches Durchflusszytometer beantragt, das mit Hilfe von 5 Lasern zur An-regung diverser Fluorophore in der Lage ist, schnell und sensitiv bis zu 21 Parameter (davon 19 Fluoreszenzen) auf komplexen Zellpopulationen zu detektieren. Das 5-Laser Multiparameter-Durchflusszytometer soll dabei integraler Bestandteil der Flow Cytometry Core Facilty des Fachbereich Medizin sowie Teil der Professur für Molekulare Immunologie des Fachbereich Biologie und Chemie werden. Mit dieser Professur werden der Potentialbereich „Infektionen, Entzündungen und Wirkstoffe“ der Universität sowie der Akzentbereich „RNA-Biochemie“ strategisch um Aspekte der T-Zell-Biologie verstärkt. Mit Hilfe des 5-Laser-Multiparameter-Durchflusszytometers sollen vor allem Projekte zur Untersuchung von Entwicklung und Funktion von Zellen des Immunsystems vorangetrieben werden. In einem Projekt zur Kartierung und Quantifizierung der Zellzyklusdynamik erfolgt eine multiparametrische Aufteilung von sich entwickelnden T-Zellen im Thymus in Kombination mit transgenen Zellzyklusindikatoren sowie der Detektion der DNA-Replikationsgeschwindigkeit. Weitere Projekte adressieren den Themenkomplex (Patho-)Physiologie der Lunge mit Projekten zur metabolischen Dynamik von Mukosa-assoziierten invarianten T-Zellen (MAIT). In weiteren Projekten werden komplexe fluoreszente Reportersysteme in vivo und in vitro eingesetzt, um mittels der Durchflusszytometrie die Aktivität von microRNAs sowie Signaltransduktionswege unterhalb des T-Zell-Rezeptors aber auch im Kontext der Fibrotisierung der Lunge zu analysieren. Weitere Projekte adressieren das komplexe immunologische Wechselspiel von Zellen in der Epidydimis sowie im Kontext der Multiplen Sklerose. Die Integration des beantragten Geräts organisatorisch in die Flow Cytometry Core Facility gewährleistet eine effiziente Geräteauslastung sowie einen interdisziplinären Einsatz.

• DFG-Verfahren: Forschungsgroßgeräte
• Großgeräte: 5-Laser Durchflusszytometer
• Gerätegruppe: 3500 Zellzähl- und Klassiergeräte (außer Blutanalyse), Koloniezähler
• Antragstellende Institution: Justus-Liebig-Universität Gießen
• Leiter: Professor Dr. Andreas Krueger