Zellzyklusabhängige Modulation der Ornithin-Decarboxylase-Aktivität und ihre Bedeutung für die Zellzyklusprogression

• Antragsteller: Privatdozent Dr. Jürgen Voigt
• Fachliche Zuordnung: Biochemie
• Förderung: Förderung von 2001 bis 2004
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5316030

Der intrazelluläre Polyamingehalt beeinflußt sowohl die Zellteilung als auch die Differenzierung eukaryotischer Zellen. Die Steuerung der Polyaminsynthese erfolgt vorwiegend über die Aktivität der Ornithin-Decarboxylase (ODC). Beim Übergang von der Wachstums- in die Zellteilungsphase wurde bei Synchronkulturen von Chlamydomonas reinhardtii eine 4-fache Erhöhung der ODC-Aktivität nachgewiesen, die mit einer Zunahme der ODC-Halbwertszeit korrelierte. Im Rahmen des beantragten Forschungsvorhabens soll nun untersucht werden, ob dieser Anstieg der ODCAktivität und der Halbwertszeit auf eine zellzyklusabhängige Änderung im Phosphorylierungsmuster zurückzuführen ist. Zu diesem Zweck soll zunächst ausgehend von einem RT-PCR Fragment die vollständige Chlamydomonas ODC-cDNA isoliert, sequenziert und in E. coli überexprimiert werden. Gegen die isolierte ODC sollen polyklonale Antikörper hergestellt werden, mit denen die Chlamydomonas ODC aus unterschiedlichen Zellzyklusstadien isoliert werden kann. Durch massenspektrometrische Analyse (ESI-MS) von Peptidgemischen soll dann das Phosphorylierungsmuster vergleichend untersucht werden. Durch Hemmung der ODC in unterschiedlichen Zellzyklusstadien soll außerdem festgestellt werden, ob der Anstieg der ODC beim Übergang in die Zellteilungsphase essentiell für die Zellteilung ist.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen