Project Details
Projekt
Biogenese von Organellen photoautotropher Organismen: Die Kontrolle der RNA-Prozessierung durch Spleißfaktoren (B 03)
Subject Area
Plant Biochemistry and Biophysics
Term
from 1998 to 2009
Project identifier
Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5482065
In diesem Projekt wird die Biogenese der Chloroplasten bei der einzelligen Grünalge Chlamydomonas reinhardtii modellhaft am Beispiel des trans-Spleißvorganges untersucht. Aufbauend auf den bisher erzielten Daten, sollen Komponenten eines putativen plastidären Spleißosoms identifiziert werden, um die molekularen Komponenten, die in trans beim Spleißen wirken, zu definieren. Die mRNA des psaA-Gens wird aus vier individuell transkribierten Chloroplasten Vorläufer-RNAs gebildet. Die drei unabhängig voneinander transkribierten Exon 1-, Exon 2- und Exon 3-Vorläufer-RNAs werden von Gruppe II Intron-Teilsequenzen flankiert. Die beiden Introngrenzen werden durch zwei getrennte trans-Spleißreaktionen entfernt und die drei Exonen des psaA-Gens durch diesen Vorgang miteinander verknüpft. Der trans-Spleißvorgang ist nur dadurch möglich, weil verschiedene kernkodierte Faktoren an diesem Prozess teilhaben. Wir haben vorwärtsgerichtete genetische aber auch biochemische Versuchsansätze genutzt, um Komponenten, die ursächlich oder mittelbar an diesem Prozess beteiligt sind, zu identifizieren. Dabei konnten neue bisher nicht charakterisierte Gene als ursächlich beteiligt identifiziert werden. Der biochemische Experimentalansatz schließlich lieferte verschiedene Proteine, die eine spezifische Bindung mit der Intron-RNA eingehen. Aus den erhaltenen Daten kann geschlossen werden, dass sie möglicherweise Teil eines plastidären Spleißosoms sind, das als RNA-Multiproteinkomplex RNA-Prozessierungsschritte katalysiert. Die zukünftigen Arbeiten werden weitere spleißdefekte Mutanten in die Projektierung einbeziehen, außerdem sollen Funktionsanalysen von RNA-Bindeproteinen deren Beteiligung am Spleißprozess belegen. Beide Experimentalstrategien tragen zur Charakterisierung eines putativen plastidären Spleißosoms bei.
DFG Programme
Collaborative Research Centres
Applicant Institution
Ruhr-Universität Bochum
Project Head
Professor Dr. Ulrich Kück
