DExH/D-Box RNA-Helikasen: Funktionsanalyse und Charakterisierung zentraler Komponenten bei der RNA-Prozessierung in Mitochondrien von Pflanzen
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Die im Rahmen dieses Projektes durchgeführten Arbeiten konzentrierten sich im wesentlichen auf drei Proteine (PMH1, PMH2 und MMH), wobei auch einzelne Teilaspekte für all fünf vorgeschlagenen DExH/D-Box-Proteine betrachtet wurden. Der deutlichste Fortschritt bei den vorgeschlagenen Analysen wurde für PMH1 und PMH2 erzielt. Ein Teil der dabei erzielten Resultate wurde Ende letzten Jahres publiziert, weitere Resultate sind bereits in einem Manuskript zusammengefasst (Anlage). Größtes Problem bei der Untersuchung der fünf vorgeschlagenen Proteine waren die unüberwindbaren Schwierigkeiten bei der Gewinnung löslicher rekombinanter Proteine. Für alle fünf Proteine wurden mindestens zwei verschiedene Expressionskonstrukte in verschiedenen Vektoren kloniert, es war jedoch nicht möglich, substantielle Mengen löslicher Proteine für die Durchführung weiterer Experimente aufzureinigen. Die in E. coli exprimierten Protein aggregierten immer zu Inclusionbodies und konnten auch nicht aktiv renaturiert werden. Zudem führt der Knockout von MMH und PMH3 zu Letalität der Embryonen, so dass homozygote Mutanten dieser Gene nicht für Analysen zu Verfügung standen. Trotz dieser Probleme wurden durch großes Engagement der beteiligten Mitarbeiter publizierbare Ergebnisse erzielt.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
- (2007) Two DEAD-box proteins may be part of RNA-dependent highmolecular-mass protein complexes in Arabidopsis mitochondria. Plant Physiol 145: 1637-1646
Matthes A, Schmidt-Gattung S, Köhler D, Forner J, Wildum S, Raabe M, Urlaub H, Binder S
