Spatio-Temporal Organisation of Genome Surveillance in Live Cells
Final Report Abstract
Im Rahmen einer interdisziplinären Zusammenarbeit der Arbeitsgruppen von T. Cremer (Zellkernarchitektur, LMU Biozentrum), A.A. Friedl (LMU Strahlenbiologie) und G. Dollinger (Institut für Angewandte Physik und Messtechnik der Universität der Bundeswehr) wurde ein experimentelles System etabliert, um die Topographie der Reparatur von Strahlenschäden auf dem Niveau von Einzelzellen aufzuklären. Dazu wurde am Münchener Tandembeschleuniger (Maier Leibnitz-Laboratorium, Vorsitzender des Forschungskollegiums Reiner Krücken) eine lonen-Mikrobestrahlungsapparatur zur zielgenauen Bestrahlung von Zellkernen lebender Zellen mit einzelnen Ionen entwickelt. Damit können DNA-Doppelstrangbrüche an ausgewählten Orten des Zellkerns hervorgerufen werden. Wir konnten die Bildung von Y-H2AX an den Bestrahlungsorten und die Rekrutierung von Reparatur-Proteinen diesen Orten sowohl mittels indirekter Immunfluoreszenz an fixierten Zellen als auch mit Hilfe der Rekrutierung von GFP-markierten Reparatur-Proteinen in lebenden Zellen nachweisen. Das Schicksal der bestrahlten Zellen konnte über viele Stunden verfolgt werden. Ein biologisch wesentliches Ergebnis dieser Untersuchungen war der Nachweis, dass DSB, die an verschiedenen Orten des Zellkerns in unterschiedlichen zeitlichen Abständen erzeugt werden, um die verfügbaren Reparaturfaktoren konkurrieren. Dieser Effekt könnte zur Unterversorgung von neuen Schadensorten führen, wenn Pools verfügbarer Reparaturfaktoren durch die Bindung an bereits vorhandene Schadensorte erschöpft werden. In Verknüpfung mit neuen Möglichkeiten fluoreszenzoptischer und elektronenmikroskopischer Untersuchungen am LMU Biozentrum bietet der heute erreichte Stand der lonen-Mikrobestrahlung mit dem System SNAKE faszinierende Perspektiven, um die Topographie und Dynamik der DNA Reparatur auf dem Einzelzell-Niveau aufzuklären.
Publications
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