Funktionelle Analyse des Adaptor-Moleküls CIN85 und seine Isoformen in vivo

• Antragsteller: Professor Dr. Ivan Dikic
• Fachliche Zuordnung: Biochemie
• Förderung: Förderung von 2004 bis 2007
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5428889

"Cbl-interacting protein of 85 kDa" (C1N85) und "CD2-associated protein" (CD2AP) sind Adapterproteine, die an einer Vielzahl von Prozessen wie Endozytose von Rezeptoren, Überleben neuronaler Zellen, Bildung der immunologischen Synapse in T-Zellen und Filtrationsprozessen in Nieren beteiligt sind. Um die physiologische und pathologische Wirkungsweise dieser Proteine besser zu verstehen, beabsichtigen wir, das CIN85-Protein inklusive seiner multiplen Varianten in der Maus durch Deletion des CIN85-Gens auszuschalten. Wir untersuchen bereits transgene Mäuse, in denen Exon 2 des CIN85-Gens deletiert wurde (CrN85-/-Dex²). Diese Mäuse bilden weder das vollständige Protein noch die überlange (xl) Isoform. Die Tiere sind lebensfähig und reproduzieren sich normal. In einigen Geweben könnte der Verlust der langen Isoformen durch die C1N85-DA- und C1N85-DABVarianten kompensiert werden, die funktionell redundant zu C1N85 und CIN85-xl sind. Die Transkription des CIN85-Gens ist durch sechs Promotoren reguliert, die über den gesamten Gen-Lokus verteilt sind. Um die Signifikanz der verschiedenen C1N85-Isoformen in vivo zu untersuchen, planen wir, C1N85-Knockout-Mäuse zu erzeugen, bei denen der gesamte C1N85-Lokus durch Anwendung des Cre/Lox-Systems deletiert wurde. CIN85 und das nahe verwandte CD2AP haben möglicherweise überlappende Funktionen, die wir anhand von C1N85/CD2AP-Doppelknockout-Tieren untersuchen wollen. Zudem scheint uns die Erzeugung und Charakterisierung von transgenen Mäusen, bei denen spezifische Isoformen ausgeschaltet wurden, notwendig. Wir planen daher, gezielt die C1N85-DA-Isoform durch Deletion von Exon 3 (C1N85-/Dex³) zu entfernen. Hingegen können alle Varianten mit SH3Domänen durch Deletion von Exon 12 (C1N85-/-Dex12) ausgeschaltet werden. Zusammenfassend sollen mit den in diesem Antrag vorgeschlagenen Experimenten die Funktionen der einzelnen C1N85-Isoformen entschlüsselt und die Auswirkung des Verlusts aller Varianten sowie des CD2AP-Proteins in vivo analysiert werden.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen