Mutagenese des humanen RYR1-Gens und Transfektion in primäre Myotubes zur funktionellen Untersuchung der Kausalität von Maligne-Hyperthermie-assoziierten Mutationen
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Der zunächst vielversprechende Erfolg bei der Mutagenese an den RyRl-Fragmenten wurde durch die frustrane Komplettligation aller 5 RyR1-Fragmente stark relativiert. Es wurden seitens der Projektgruppe Humangenetik/Charite erhebliche Anstrengungen personeller, verfahrenstechnischer, zeitlicher und theoretischer Art unternommen, diesen molekulargenetischen Technologieschritt als Voraussetzung für die nachfolgenden zu realisieren. Der Projektabschnitt der Transfektion imitierter humaner RyR1-cDNA mittels Lipofection in native normale Myotubes an der Klinik für Anästhesie/Universität Leipzig war somit nicht möglich. Kritische Diskussion: Auf Erfahrungen anderer wissenschaftlicher Arbeitsgruppen mit humaner RyR1-cDNA kann nicht zurückgegriffen werden. Für bisherige Transfektionen in HEK-293 und COS-1 Zellen wurden Kaninchen-cDNA genutzt. In den letzten Jahren wurde jedoch auch mit diesem Modell nur für wenige Mutationen ein funktioneller Kausalitätsbeweis für die MH erbracht. Innerhalb der Sektion Genetik der European Malignant Hyperthermia Group wird momentan auf eine enge multizentrische Zusammenarbeit bei funktionellen Experimenten gedrungen, da sich eine gewisse Überforderung der einzelnen MH Zentren abzeichnet. Letzteres kann durch die eigenen Erfahrungen bestätigt werden, so dass eine Kooperation aus unserer Sicht auch zwingend notwendig ist. Durch die Bündelung des gemeinsamen know-how's verspricht man sich eine deutlich höhere Effizienz, die Menge an nachgewiesenen RyR1-Mutationen letztlich auch funktionell bezüglich ihrer MH-Relevanz zu charakterisieren. Über die hierbei genutzten Methoden soll ein Konsens erzielt werden. In der eigenen Arbeitsgruppe werden auch in der Zukunft kontinuierlich Ca++-Imaging Untersuchungen an allerdings nativen Myotubes von MH-Patienten mit einer nachgewiesen RyR1-Mutation durchgeführt.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
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A fulminant MH crisis following repeatedly inconspicuous anaesthesias. 25th Annual meeting of the European MH group, Riga 25-27.Mai 2006
H. Rueffert, M., K. Sipli, H Adam, M. Wehner, D. Olthoff
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Abstract book 5th Biotechnology Symposium 2006, Universität Leipzig S. 277
G, Brakmann S, Eichler S.
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C-terminale skelettmuskuläre Ryanodinrezeptormutationen. DAC 17.-20.05. 2006; Leipzig,2008
Wehner M, Rüffert H, Meinecke CD, Geier D, König F, Olthoff D.
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Can we improve on phenotyping for malignant hyperthermia? 25th Annual meeting of the European MH group, Riga 25-27.Mau 2006
T. Girard, H. Rueffert, A. Li Wan Po
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Can we improve on phenotyping for malignant hyperthermia? ASA Annual Meeting, 14.-18. 10.2006, Chicago IL
T.Girard, H.Rueffert, A.Li Wan Po
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RYR1 mutation update 2005. 25th Annual meeting of the European MH group, Riga 25-27.Mai 2006
M. Anetseder, N. Cozzolino, T. Girard, R Krivosic-Horber, Y. Nivoche, H. Rueffert, A, Urwyler
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Screening for MH related mutations in the RYR1-coding region and functional assessment 25th Annual meeting of the European MH group, Riga 25-27.Mai 2006
M. Wehner, H. Rueffert, C. Meinecke, K. Krist, D. Geier, F. König, D. Olthoff
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Fulminante Maligne Hyperthermie: Untypischer Verlauf während der 9.Allgemeinanästhesie. AINS 2007; 42: 692-699.
H.Adam, U.Gottschaldt, N.Pausch, H.Rüffert, K.Sipli
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How clear are our genetic resuts in the diagnosis of MH susceptibility? 26 Annual meeting of the European MH group, Siena 20-23 .Mai 2007
H. Rüffert
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Malignant Hyperthermia: The ugly. Anaesthesist 2007; 24: 819-825.
H.Rüffert, M.Wehner, C.Deutrich, D.Olthoff
