Regulation der Androgenrezeptoraktivität durch Phosphorylierung der Corepressoren NCoR und SMRT
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Im vorliegenden Projekt haben wir festgestellt, dass der Corepressor NCoR zwar in COS-1-Zellen die Transaktivierungsfähigkeit des AR mindert, überraschenderweise aber nicht in den untersuchten PCa-Zelllinien. Den Grund dafür konnten wir nicht vollständig klären, aber es scheint, dass der Corepressor in der PCa-Zellinie PC-3 anders an den AR bindet als in COS-1-Zellen: In COS-1-Zellen konnten wir mit Hilfe eines Zwei-hybrid-Systems eine Bindung sowohl des vollständigen Repressor-Proteines als auch seiner Termini feststellen, wohingegen in der PCa-Zellinie lediglich eine Bindung des NCoR-C-terminus an den AR messbar war. Diese Experimente zeigten einmal mehr, dass Zellsysteme im Hinblick auf das natürliche Vorkommen der untersuchten Proteine mit Bedacht gewählt sein sollten. Darüber hinaus erscheint die Vermutung eine verminderte Expression von Repressoren könne zur Tumorentstehung beitragen in neuem Licht, da in unseren Experimenten eine Überexpression des Repressors in PCa-Zelllinien eher zu einer Steigerung der AR-Transaktivierungsfähigkeit führte. Zusätzlich haben wir die Auswirkungen möglicher Phosphorylierungen durch die Proteinkinase CK2 auf die AR-NCoR-Wechselwirkung untersucht. Dazu wurden mehrere Phosphomutanten hergestellt. Die Phosphorylierung der Aminosäure Serin 2371, möglicherweise durch die CK2, scheint eine Rolle für die Interaktion von NCoR mit dem AR zu spielen. Die Mutation dieser Aminosäure zu Alanin verhindert eine durch DHT verursachte Verringerung der Bindung der beiden Proteine. Dieser Effekt konnte ebenso mit CK2-Inhibtoren und mit kinasedefizienten CK2-Mutanten hervorgerufen werden. Durch Mutation der Aminosäure Serin 2449 zu Alanin verlor der Repressor dagegen seine Fähigkeit den AR zu reprimieren. Die Rolle dieses Serin für die Repressionsfähigkeit von NCoR ist derzeit Gegenstand weiterer Untersuchungen.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
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Androgens 2010 (Leuven, Belgien): Inabilty of NCoR/SMRT to repress androgen receptor transcriptional activity in prostate cancer cell lines
Martin Laschak, Marina Bechtel, Klaus-Dieter Spindler, Andrea Hessenauer
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Are corepressors always repressors? Endocrinology Studies 1:e8.4. (2011)
Hessenauer A, Laschak M, Spindler KD
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Inability of NCoR/SMRT to repress androgen receptor transcriptional activity in prostate cancer cell lines. Int J Mol Med. 28:645-651. (2011)
Laschak M, Bechtel M, Spindler KD, Hessenauer A
