Konfokalmikroskop
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Obwohl pilzliche Produktionsstämme wie A. niger eine herausragende Rolle in der Biotechnologie einnehmen, ist das Verständnis für die Regulation als auch die Dynamik des Proteintransports, der Proteinsekretion und der Zellmorphologie sehr lückenhaft. Diese Prozesse limitieren jedoch maßgeblich die Produktivität aufgrund von Ausbeuteverlusten durch intrazelluläre Proteindegradation sowie suboptimalem Wachstum und Energieeintrag durch ungünstige makroskopische Morphologien. Mit Hilfe des live-imaging werden daher die Proteinsekretion und das polare Wachstum von A. niger in vivo studiert, um die zugrunde liegenden zellulären Transportprozesse zu modellieren und die hierbei involvierten Regulationsnetzwerke zu identifizieren. In vorangegangenen Arbeiten mit A. niger konnte wir bereits einige regulatorische Proteine des polaren Wachstums identifizieren und deren intrazelluläre Lokalisation studieren. Im Zuge des neu erworbenen CLSMs haben wir verschiedene fluoreszenzmarkierte Markerstämme für A. niger untersucht, in denen die Lokalisation von Organellen (z.B. ER, Golgi), dem Zytoskelett, Proteinkomplexen (z.B. Spitzenkörper, Polarisom), sekretorischen Vesikel (z.B. via vSNAREs) sowie Signalmolekülen (z.B. GTPase RacA, ArfA) nun zeit- und ortsaufgelöst verfolgt werden können. Unser Ziel ist, die erste intrazelluläre 3D-Landkarte von wachsenden A. niger Hyphen zu erstellen, die die Basis für alle weiteren Projekte der Arbeitsgruppe legen wird.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
-
Molecular genetic analysis of vesicular transport in Aspergillus niger reveals partial conservation of the molecular mechanism of exocytosis in fungi. Microbiology. 2014 Feb;160(Pt 2):316-29
Kwon MJ, Arentshorst M, Fiedler M, de Groen FL, Punt PJ, Meyer V, Ram AF
