Biochemische Charakterisierung und Struktur-Funktionsbeziehung der GTP-bindenden Domäne des Trans-Aktivatorproteins CIITA
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Die durchgeführten Arbeiten an CITTA haben eine Kristallstrukturbestimmung der GTP-bindenden Domäne bisher leider nicht ermöglicht, im Labor des Antragstellers wird jedoch weiter an diesem Thema gearbeitet. Die regulatorische N-terminale CARD Domäne von CIITA (1-133 bzw. 1-166) war löslich und stabil, erwies sich aber in NMR Experimenten als unstrukturiert. Das kernständige CIITA Protein zielt für die Aktivierung der Transkription der MHC Klasse n Gene auf den Komplex des positiven Transkriptionselongations- Faktors P-TEFb. P-TEFb setzt sich aus der Kinase Cdk9 und einem Cyclin T Protein zusammen. Zur Stimulation der Transkriptionsaktivität der RNA Polymerase n bindet CIITA direkt an Cyclin Tl. Dabei scheint es den Kinase-Inhibitor Heximl von P-TEFb zu verdrängen, was zur Phosphorylierung der C-terminalen Domäne der RNAP n führt. Wir haben in ersten Arbeiten die Cyclin T-Bindungsdomäne von Heximl identifiziert und die Bindungskompetition mit dem viralen HIV-1 Tat Protein untersucht. Im weiteren Verlauf der Arbeiten konnte die Cyclin-box Domäne von Cyclin Tl durch Röntgenstrukturanalyse bestimmt werden und Unterschiede und Spezifitäten im Vergleich verschiedener Cycline analysiert werden. Außerdem wurde die Struktur der Cyclin T-Bindungsdomäne von Heximl mittels NMR Spektroskopie gelöst und durch Mutagenesestudien die Bindungsoberfläche zu Cyclin Tl analysiert. In nächsten Experimenten soll nun die wechselseitige Interaktion von CIITA oder Heximl mit Cyclin Tl untersucht werden mit dem Ziel, den CnTA-CycTl Komplex aus beiden Proteinen zu bilden und dadurch hoffentlich die Löslichkeit und Stabilität beider Proteine zu verbessern.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
- "Identification of a Cyclin T-Binding Domain in Heximl and Biochemical Analysis of its Binding Competition with HIV-1 Tat", Journal of Biological Chemistry 280, 24968-24977 (2005)
Antje Schulte, Nadine Czudnochowski, Matjaz Barboric, André Schönichen, Dalibor Blazek, B. Matija Peterlin and Matthias Geyer
- "NMR assignment of the Cyclin T-binding domain of human Heximl", Journal of Biomolecular NMR 36, 39 (2006)
Sonja A. Dames, André Schönichen, Stephan Grzesiek and Matthias Geyer
- "Cyclin box structure of the P-TEFb subunit Cyclin Tl derived from a fusion complex with EIAV Tat", Journal of Molecular Biology 370, 826-836 (2007)
Kanchan Anand, Antje Schulte, Koh Fujinaga, Klaus Scheffzek and Matthias Geyer
- "Die Regulation der Transkription ist eine Schnittstelle zwischen Zellwachstum und HIV-stimulierter Genexpression", Max-Planck-Jahresbericht (2007)
Antje Schulte, Nadine Czudnochowski, André Schönichen und Matthias Geyer
- "Structure of the Cyclin T binding domain of Heximl and molecular basis for its recognition of P-TEFb", Proceedings of the National Academy of Sciences USA 104, 14312-14317 (2007)
Sonja A. Dames, André Schönichen, Antje Schulte, Matjaz Barboric, B. Matija Peterlin, Stephan Grzesiek and Matthias Geyer
